作者：陳立新， 謝治民， 譚年元
【摘要】 比較了幾種自氧化體系產生超氧自由基的效果，選定鄰苯三酚自氧化體系產生超氧自由基，用單掃描示波極譜法掃描，研究8種中草藥對超氧自由基的清除作用。
【關鍵詞】 中草藥; 單掃描示波極譜法; 超氧自由基; 清除作用
Abstract:The effects of producing the superoxide free radicals by the several of oxidation system have been studied. The pyrogallol acid was used by single-sweep oscillopolarography to determine the scavenging superoxide free radical activity against of Eight Chinese drugs.
Key words:Chinese drugs; Single sweep oscillopolarography; Superoxide free radical; Scavenging effect
自由基在人體內能引起機體氧化，損害細胞，導致機體衰老和各種疾病。自由基是一種外層軌道含有未配對 電子 的特殊狀態分子或原子團，其中超氧自由基(O-2·)與人體最為密切。一些物質，如超氧化物歧化酶(SOD)、維生素C、維生素E、胡蘿蔔素等能清除人體的自由基。但體內的O-2·濃度隨年齡的增長而增加，自由基清除能力則隨年齡的增加而減少，有時不能提供足夠的量來消除O-2·[1]。因此研究和尋找外源性O-2·清除劑在人體保健、治病方面具有重要意義，從天然動植物，尤其是從具有悠久 歷史 的中草藥中尋找高效的超氧自由基清除劑，已引起了國內外學者的極大興趣[1～5]。
分子氧在單電子還原時有超氧陰離子自由基O-2·中間體生成。O-2·既可作為電子的給予體，又可接受電子，在體內可通過電子轉移反應衍生出其它活性氧。從研究的角度來說，獲得O-2·大體有多種方法[6,7]。本文採用化學法產生O-2·，且對比了鄰苯三酚[8,9]、亞甲基蘭、二甲基亞碸生成O-2·的效率。
中草藥含有多種能夠清除自由基的化合物，其抗氧化成分可歸納為6大類：黃酮類、苯酚類、皂苷類、鞣質類、生物鹼類和其他類[9～11]。近年來對中藥抗自由基作用的研究多採用電子自旋共振、化學發生等方法，用電化學方法研究中藥對超氧自由基的清除作用報道較少。但是後者也有其優勢所在，所用儀器簡單，操作簡單，成本低，相對於化學發光法，不受到溶液顏色和惰性雜質的影響。本文利用電化學分析方法，研究了幾種中草藥對超氧自由基的清除作用，對推動進一步研究中草藥在延緩機體衰老方面將發揮有利作用。
1 儀器和試劑
JP-303型極譜分析儀(成都分析儀器廠);滴汞電極、飽和甘汞電極和鉑電極組成的三電極系統;電子天平(AL104，梅特勒-托利多儀器有限公司);PHS-3C型酸度計(蕭山市分析儀器廠)。
鄰苯三酚(宜興興隆化工有限公司)，三羥甲基氨基甲烷(上海山浦化工有限公司)。
其餘試劑均為國產分析純，實驗用水均為二次蒸餾水。
紅花、何首烏、當歸、苡米、白芷、丹參、黃芩、茯苓8種中草藥購於藥材公司，經檢驗均為正品。
2 方法與結果
2.1 超氧自由基化學發生體系的比較
2.1.1 方法鄰苯三酚、亞甲基蘭和二甲基亞碸均能發生自氧化反應產生超氧自由基陰離子，研究了三者產生超氧自由基陰離子的效率。
分別製取0.2 mmol/L鄰苯三酚溶液、1 mg/ml亞甲基蘭溶液、3.5 mg/ml二甲基亞碸溶液、0.2 mol/L三羥甲基氨基甲烷溶液、pH=9.0的NH3-NH4Cl緩衝溶液。
在25.0 ml的0.2 mol/L三羥甲基氨基甲烷溶液中加入5.0 ml的0.1 mol/L鹽酸，稀釋至100 ml，得到pH=9.0的緩衝溶液。取10.0 ml為底液，加入1.0 ml的0.2 mmol/L鄰苯三酚溶液，再加2.00 ml蒸餾水。採用線性掃描法記錄二階導數極譜波。
移取10.0 ml pH=9.0的NH3-NH4Cl緩衝溶液，加入1.0 ml的3.5 mg/ml二甲基亞碸溶液，再加2.0 ml蒸餾水。採用線性掃描法記錄二階導數極譜波。
移取10.0 ml pH=9.0的NH3-NH4Cl緩衝溶液，加入1.0 ml的1 mg/ml亞甲基蘭溶液，再加2.0 ml蒸餾水。採用線性掃描法記錄二階導數極譜波。
2.1.2 結果討論在pH=9.0的HC1-Tris緩衝溶液中，鄰苯三酚可發生自氧化反應產生超氧自由基陰離子，在-0.676 V處有一還原峰，此峰為檢測對象，它先逐漸增高，到一定時間後又緩慢降低。峰高隨時間的變化如圖所示。此峰在4.0 min處最高，且變化較小，記錄該峰在此時間點的峰高值作為空白對照讀數。
在pH=9.0的NH3-NH4Cl緩衝溶液中，二甲基亞碸和亞甲基蘭均可發生自氧化反應產生超氧自由基陰離子，兩者分別在-0.700 V、-0.682 V處有一還原峰，峰形均它先逐漸增高，到一定時間後又緩慢降低。峰高隨時間的變化如圖1所示。二甲基亞碸在4.0 min處最高，且變化較小;亞甲基蘭在3.0 min處最高，且變化較小。分別取此峰高最大處的時間點作為分析點，記錄峰高值作為空白對照讀數。
圖1 鄰苯三酚、二甲基亞碸、亞甲基蘭的峰電流隨時間的關係
圖1中3條曲線從上到下分別為鄰苯三酚、二甲基亞碸、亞甲基蘭的峰電流和時間的關係，鄰苯三酚、二甲基亞碸、亞甲基蘭3種試劑在鹼性條件下，在-0.68 V左右均能產生超氧自由基，但鄰苯三酚產生超氧自由基的效果比另外兩種試劑的效果要好的多。因此在測定8種中草藥清除超氧自由基作用的實驗中，產生超氧自由基採用鄰苯三酚自氧化法。
轉貼於論文聯盟 http://www.lwlm.com
【摘要】 比較了幾種自氧化體系產生超氧自由基的效果，選定鄰苯三酚自氧化體系產生超氧自由基，用單掃描示波極譜法掃描，研究8種中草藥對超氧自由基的清除作用。
【關鍵詞】 中草藥; 單掃描示波極譜法; 超氧自由基; 清除作用
Abstract:The effects of producing the superoxide free radicals by the several of oxidation system have been studied. The pyrogallol acid was used by single-sweep oscillopolarography to determine the scavenging superoxide free radical activity against of Eight Chinese drugs.
Key words:Chinese drugs; Single sweep oscillopolarography; Superoxide free radical; Scavenging effect
自由基在人體內能引起機體氧化，損害細胞，導致機體衰老和各種疾病。自由基是一種外層軌道含有未配對 電子 的特殊狀態分子或原子團，其中超氧自由基(O-2·)與人體最為密切。一些物質，如超氧化物歧化酶(SOD)、維生素C、維生素E、胡蘿蔔素等能清除人體的自由基。但體內的O-2·濃度隨年齡的增長而增加，自由基清除能力則隨年齡的增加而減少，有時不能提供足夠的量來消除O-2·[1]。因此研究和尋找外源性O-2·清除劑在人體保健、治病方面具有重要意義，從天然動植物，尤其是從具有悠久 歷史 的中草藥中尋找高效的超氧自由基清除劑，已引起了國內外學者的極大興趣[1～5]。
分子氧在單電子還原時有超氧陰離子自由基O-2·中間體生成。O-2·既可作為電子的給予體，又可接受電子，在體內可通過電子轉移反應衍生出其它活性氧。從研究的角度來說，獲得O-2·大體有多種方法[6,7]。本文採用化學法產生O-2·，且對比了鄰苯三酚[8,9]、亞甲基蘭、二甲基亞碸生成O-2·的效率。
中草藥含有多種能夠清除自由基的化合物，其抗氧化成分可歸納為6大類：黃酮類、苯酚類、皂苷類、鞣質類、生物鹼類和其他類[9～11]。近年來對中藥抗自由基作用的研究多採用電子自旋共振、化學發生等方法，用電化學方法研究中藥對超氧自由基的清除作用報道較少。但是後者也有其優勢所在，所用儀器簡單，操作簡單，成本低，相對於化學發光法，不受到溶液顏色和惰性雜質的影響。本文利用電化學分析方法，研究了幾種中草藥對超氧自由基的清除作用，對推動進一步研究中草藥在延緩機體衰老方面將發揮有利作用。
1 儀器和試劑
JP-303型極譜分析儀(成都分析儀器廠);滴汞電極、飽和甘汞電極和鉑電極組成的三電極系統;電子天平(AL104，梅特勒-托利多儀器有限公司);PHS-3C型酸度計(蕭山市分析儀器廠)。
鄰苯三酚(宜興興隆化工有限公司)，三羥甲基氨基甲烷(上海山浦化工有限公司)。
其餘試劑均為國產分析純，實驗用水均為二次蒸餾水。
紅花、何首烏、當歸、苡米、白芷、丹參、黃芩、茯苓8種中草藥購於藥材公司，經檢驗均為正品。
2 方法與結果
2.1 超氧自由基化學發生體系的比較
2.1.1 方法鄰苯三酚、亞甲基蘭和二甲基亞碸均能發生自氧化反應產生超氧自由基陰離子，研究了三者產生超氧自由基陰離子的效率。
分別製取0.2 mmol/L鄰苯三酚溶液、1 mg/ml亞甲基蘭溶液、3.5 mg/ml二甲基亞碸溶液、0.2 mol/L三羥甲基氨基甲烷溶液、pH=9.0的NH3-NH4Cl緩衝溶液。
在25.0 ml的0.2 mol/L三羥甲基氨基甲烷溶液中加入5.0 ml的0.1 mol/L鹽酸，稀釋至100 ml，得到pH=9.0的緩衝溶液。取10.0 ml為底液，加入1.0 ml的0.2 mmol/L鄰苯三酚溶液，再加2.00 ml蒸餾水。採用線性掃描法記錄二階導數極譜波。
移取10.0 ml pH=9.0的NH3-NH4Cl緩衝溶液，加入1.0 ml的3.5 mg/ml二甲基亞碸溶液，再加2.0 ml蒸餾水。採用線性掃描法記錄二階導數極譜波。
移取10.0 ml pH=9.0的NH3-NH4Cl緩衝溶液，加入1.0 ml的1 mg/ml亞甲基蘭溶液，再加2.0 ml蒸餾水。採用線性掃描法記錄二階導數極譜波。
2.1.2 結果討論在pH=9.0的HC1-Tris緩衝溶液中，鄰苯三酚可發生自氧化反應產生超氧自由基陰離子，在-0.676 V處有一還原峰，此峰為檢測對象，它先逐漸增高，到一定時間後又緩慢降低。峰高隨時間的變化如圖所示。此峰在4.0 min處最高，且變化較小，記錄該峰在此時間點的峰高值作為空白對照讀數。
在pH=9.0的NH3-NH4Cl緩衝溶液中，二甲基亞碸和亞甲基蘭均可發生自氧化反應產生超氧自由基陰離子，兩者分別在-0.700 V、-0.682 V處有一還原峰，峰形均它先逐漸增高，到一定時間後又緩慢降低。峰高隨時間的變化如圖1所示。二甲基亞碸在4.0 min處最高，且變化較小;亞甲基蘭在3.0 min處最高，且變化較小。分別取此峰高最大處的時間點作為分析點，記錄峰高值作為空白對照讀數。
圖1 鄰苯三酚、二甲基亞碸、亞甲基蘭的峰電流隨時間的關係
圖1中3條曲線從上到下分別為鄰苯三酚、二甲基亞碸、亞甲基蘭的峰電流和時間的關係，鄰苯三酚、二甲基亞碸、亞甲基蘭3種試劑在鹼性條件下，在-0.68 V左右均能產生超氧自由基，但鄰苯三酚產生超氧自由基的效果比另外兩種試劑的效果要好的多。因此在測定8種中草藥清除超氧自由基作用的實驗中，產生超氧自由基採用鄰苯三酚自氧化法。
轉貼於論文聯盟 http://www.lwlm.com
收藏