作者：徐穎， 左科， 甘曼， 魯宏， 郭蓮軍
【關鍵詞】隔山消
摘要：目的探討隔山消對藥物所致小鼠空間 學習 記憶障礙的作用，並初步探討其作用機理。 方法 50隻昆明小鼠隨機平均分為空白對照組、模型組、陽性對照組(刺五加註射液)、隔山消高、低劑量組，各組動物在作相應的處理之後，於Morris水迷宮實驗中測試其潛伏期。各組動物完成行為實驗後頸椎脫臼處死。在低溫下取其腦組織，用羥胺比色法測定腦組織中Ach含量和Ach-E的活性。結果模型組動物達岸時間(即潛伏期)明顯延長，表明空間學習記憶產生障礙；陽性對照組，隔山消高、低劑量組潛伏期均明顯低於模型組，且第3天成績好於空白對照組。三者相互比較，隔山消高劑量組第3天成績最好。隔山消高，低劑量組的Ach含量明顯高於模型組，而隔山消高低劑量組的AchE活性均略高於模型組，且均低於陽性對照組。結論隔山消對於藥物所致的空間學習記憶障礙有一定的作用。
關鍵詞：隔山消； 空間記憶障礙； Morris水迷宮實驗； 小鼠
The Effects of Cynachum uilfordii (Maxim) Hemsl on the Learning Memory Disorder Caused by Drug in Mouse
Abstract:ObjectiveTo investigate the effects of Cynachum uilfordii (Maxim) Hemsl on the mouse space learning memory disorder caused by drug and to investigate the mechanism of effection.Methods50 mouse were randomly divided into blank matched group,model group,positive control group(manyprickle acanthopanax root injection),Cynachum uilfordii high dosage group(15 g/kg) and low dosage group (7.5 g/kg).Each group was deal with severally,then measured the latent periods in Morris Water Maze test.The mouse of each group were put to death by dislocating thEir cervical vertebras after the behavior tests.The brain was hydroxylamine colorimetric method.ResultsThe reachingbank time (latent period)of model group prolonged obviously, which showed the space learing memory disorder;The latent periods of positive control group,Cynachum uilfordii high dosage group and low dosage group prolonged control group,Cynachum uilfordii high dosage group was the best of the three above.The content of Ach of Cynachum uilfordii high dosage group and low dosage group was visibly high dosage group and low dosage group were appreciably higher than that of model group,and both of them were lower than of positive control group.ConclusionThe results indicated the Cynachum uilfordii(Maxim)Hemsl has effect on the space learing memory disorder caused by drug.
Key words:Cynachum uilfordii(Maxim) Hemsl; Learning memory disorder; Morris Water Maze test; Mouse
學習記憶屬高級神經活動。學習和記憶的基本過程大致可分為三個階段：獲得，鞏固和再現。了解學習記憶過程，提高學習記憶能力，無疑是當今 社會 一個值得關注的課題。根據學習記憶的生理生化基礎， 目前 多選用一些化學藥品致記憶損傷。從而複製出學習記憶障礙模型，以 研究 各種藥物對某些藥物所致的學習記憶障礙方面的改善作用。近年來，我國傳統的中藥越來越受到重視，中藥在許多疾病的 治療 上，顯示出的優越性是許多西藥所不及的。隔山消Cynachum uilfordii(Maxim)Hemsl又名白首烏，是祖國傳統中藥，具有養血益肝，固腎益精，烏須黑髮和延年益壽的功效。現在研究發現白首烏中含有多種有效成分，具有抗腫瘤，抗衰老等多方面的藥理活性，其主要成分為羥基馬甾烷酯苷，其中富含磷脂類成分，可以抗腫瘤抗衰老，而且對腦細胞具有保護作用。據此設計本實驗，研究隔山消對藥物所致小鼠學習記憶障礙的 影響 ，並測定其大腦中Ach含量和Ach-E活性的改變，以初步探討其可能的作用機理。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 動物與藥品選用成年健康的昆明種小鼠，雌雄各半，體重20～30 g，由華中 科技 大學同濟醫學院實驗動物中心提供。隔山消，中藥原材料，購自湖北省中藥材公司，由湖北中醫學院藥學部進行加工粉粹過篩120目，實驗時取7 g粉末，加入45 g純凈水，文火加熱至沸騰，靜置10 min後，過濾兩次取其過濾液。4℃保存，灌胃前適當加溫。刺五加註射液(有效成分黃酮5 mg/ml，批號ZZ5397黑衛藥准字(1990)第200416號)，黑龍江烏蘇里江製藥有限公司。戊巴比妥鈉粉劑，上海試劑分購度試劑廠，批號：860603，用蒸餾水配置成1.5%溶液，供腹腔注射。溴化乙醯膽鹼，其他試劑均為市售 分析 純或化學純。
1.1.2 儀器Morris水迷宮系統：水桶直徑76 cm，桶高36 cm，水深12.9 cm，安全島高：11.4 cm， 計算 機軟體系統：泰盟Bio2000實驗系統；攝像機；SONY；台式高速冷凍離心機TL16R(上海離心機研究所)；722型分光光度計；上海申化儀表自控公司產品。
1.2 方法
1.2.1 動物分組與模型的建立將50隻小鼠隨機分為5組，每組10隻，①空白對照組：不給予任何藥物，於每次訓練前1 h灌胃(NS，0.5 ml/20 g)②模型組：於實驗前3 d開始每天腹腔注射戊巴比妥鈉1次(劑量：1.5 mg/ml,0.1 ml/10 g體重)。開始實驗後，每次訓練前30 min戊巴比妥鈉腹腔注射(劑量同上)③陽性對照組：於實驗前6 d開始每天腹腔注射1次刺五加註射液(劑量：1.5 mg/ml,0.1 ml/10 g體重)。開始實驗後於訓練前1 h腹腔注射剌五加註射液，劑量同上。④隔山消低、高劑量組：實驗開始前6 d開始每天灌胃(隔山消，7.5，15 g/kg)實驗開始後每天提前1 h灌胃。其中，陽性對照組，隔山消低、高劑量組在實驗開始後，於每天訓練前30 min腹腔注射戊巴比妥鈉1次(劑量：1.5 mg/ml,0.1 ml/10 g體重)。
1.2.2 行為學實驗方法用過圓心的兩條相互垂直線分水迷宮為A，B，C，D 4個象限，安全島位於A象限，位置固定。每天將小鼠依次從B，C，D區面朝桶壁放入水迷宮中，記錄其自下水到抵達並停留在安全島(A區)上所用的時間，即潛伏期。以120 s為限，若此時間內動物不能到達安全島，在將此小鼠安置於安全島上10 s，讓其熟悉環境。
1.2.3 Ach含量和Ach-E活性測定實驗結束後，於冰台上以頸椎脫臼法處死，並迅速取出全腦，去其腦幹及小腦，用水生理鹽漂洗，濾紙吸干後稱重，樣品以冰生理鹽水配製成20%勻漿液，4℃ 4 500 r/min離心5 min，取其上清液，按羥胺比色法進行Ach含量，Ach-E活性測定。
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【關鍵詞】隔山消
摘要：目的探討隔山消對藥物所致小鼠空間 學習 記憶障礙的作用，並初步探討其作用機理。 方法 50隻昆明小鼠隨機平均分為空白對照組、模型組、陽性對照組(刺五加註射液)、隔山消高、低劑量組，各組動物在作相應的處理之後，於Morris水迷宮實驗中測試其潛伏期。各組動物完成行為實驗後頸椎脫臼處死。在低溫下取其腦組織，用羥胺比色法測定腦組織中Ach含量和Ach-E的活性。結果模型組動物達岸時間(即潛伏期)明顯延長，表明空間學習記憶產生障礙；陽性對照組，隔山消高、低劑量組潛伏期均明顯低於模型組，且第3天成績好於空白對照組。三者相互比較，隔山消高劑量組第3天成績最好。隔山消高，低劑量組的Ach含量明顯高於模型組，而隔山消高低劑量組的AchE活性均略高於模型組，且均低於陽性對照組。結論隔山消對於藥物所致的空間學習記憶障礙有一定的作用。
關鍵詞：隔山消； 空間記憶障礙； Morris水迷宮實驗； 小鼠
The Effects of Cynachum uilfordii (Maxim) Hemsl on the Learning Memory Disorder Caused by Drug in Mouse
Abstract:ObjectiveTo investigate the effects of Cynachum uilfordii (Maxim) Hemsl on the mouse space learning memory disorder caused by drug and to investigate the mechanism of effection.Methods50 mouse were randomly divided into blank matched group,model group,positive control group(manyprickle acanthopanax root injection),Cynachum uilfordii high dosage group(15 g/kg) and low dosage group (7.5 g/kg).Each group was deal with severally,then measured the latent periods in Morris Water Maze test.The mouse of each group were put to death by dislocating thEir cervical vertebras after the behavior tests.The brain was hydroxylamine colorimetric method.ResultsThe reachingbank time (latent period)of model group prolonged obviously, which showed the space learing memory disorder;The latent periods of positive control group,Cynachum uilfordii high dosage group and low dosage group prolonged control group,Cynachum uilfordii high dosage group was the best of the three above.The content of Ach of Cynachum uilfordii high dosage group and low dosage group was visibly high dosage group and low dosage group were appreciably higher than that of model group,and both of them were lower than of positive control group.ConclusionThe results indicated the Cynachum uilfordii(Maxim)Hemsl has effect on the space learing memory disorder caused by drug.
Key words:Cynachum uilfordii(Maxim) Hemsl; Learning memory disorder; Morris Water Maze test; Mouse
學習記憶屬高級神經活動。學習和記憶的基本過程大致可分為三個階段：獲得，鞏固和再現。了解學習記憶過程，提高學習記憶能力，無疑是當今 社會 一個值得關注的課題。根據學習記憶的生理生化基礎， 目前 多選用一些化學藥品致記憶損傷。從而複製出學習記憶障礙模型，以 研究 各種藥物對某些藥物所致的學習記憶障礙方面的改善作用。近年來，我國傳統的中藥越來越受到重視，中藥在許多疾病的 治療 上，顯示出的優越性是許多西藥所不及的。隔山消Cynachum uilfordii(Maxim)Hemsl又名白首烏，是祖國傳統中藥，具有養血益肝，固腎益精，烏須黑髮和延年益壽的功效。現在研究發現白首烏中含有多種有效成分，具有抗腫瘤，抗衰老等多方面的藥理活性，其主要成分為羥基馬甾烷酯苷，其中富含磷脂類成分，可以抗腫瘤抗衰老，而且對腦細胞具有保護作用。據此設計本實驗，研究隔山消對藥物所致小鼠學習記憶障礙的 影響 ，並測定其大腦中Ach含量和Ach-E活性的改變，以初步探討其可能的作用機理。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 動物與藥品選用成年健康的昆明種小鼠，雌雄各半，體重20～30 g，由華中 科技 大學同濟醫學院實驗動物中心提供。隔山消，中藥原材料，購自湖北省中藥材公司，由湖北中醫學院藥學部進行加工粉粹過篩120目，實驗時取7 g粉末，加入45 g純凈水，文火加熱至沸騰，靜置10 min後，過濾兩次取其過濾液。4℃保存，灌胃前適當加溫。刺五加註射液(有效成分黃酮5 mg/ml，批號ZZ5397黑衛藥准字(1990)第200416號)，黑龍江烏蘇里江製藥有限公司。戊巴比妥鈉粉劑，上海試劑分購度試劑廠，批號：860603，用蒸餾水配置成1.5%溶液，供腹腔注射。溴化乙醯膽鹼，其他試劑均為市售 分析 純或化學純。
1.1.2 儀器Morris水迷宮系統：水桶直徑76 cm，桶高36 cm，水深12.9 cm，安全島高：11.4 cm， 計算 機軟體系統：泰盟Bio2000實驗系統；攝像機；SONY；台式高速冷凍離心機TL16R(上海離心機研究所)；722型分光光度計；上海申化儀表自控公司產品。
1.2 方法
1.2.1 動物分組與模型的建立將50隻小鼠隨機分為5組，每組10隻，①空白對照組：不給予任何藥物，於每次訓練前1 h灌胃(NS，0.5 ml/20 g)②模型組：於實驗前3 d開始每天腹腔注射戊巴比妥鈉1次(劑量：1.5 mg/ml,0.1 ml/10 g體重)。開始實驗後，每次訓練前30 min戊巴比妥鈉腹腔注射(劑量同上)③陽性對照組：於實驗前6 d開始每天腹腔注射1次刺五加註射液(劑量：1.5 mg/ml,0.1 ml/10 g體重)。開始實驗後於訓練前1 h腹腔注射剌五加註射液，劑量同上。④隔山消低、高劑量組：實驗開始前6 d開始每天灌胃(隔山消，7.5，15 g/kg)實驗開始後每天提前1 h灌胃。其中，陽性對照組，隔山消低、高劑量組在實驗開始後，於每天訓練前30 min腹腔注射戊巴比妥鈉1次(劑量：1.5 mg/ml,0.1 ml/10 g體重)。
1.2.2 行為學實驗方法用過圓心的兩條相互垂直線分水迷宮為A，B，C，D 4個象限，安全島位於A象限，位置固定。每天將小鼠依次從B，C，D區面朝桶壁放入水迷宮中，記錄其自下水到抵達並停留在安全島(A區)上所用的時間，即潛伏期。以120 s為限，若此時間內動物不能到達安全島，在將此小鼠安置於安全島上10 s，讓其熟悉環境。
1.2.3 Ach含量和Ach-E活性測定實驗結束後，於冰台上以頸椎脫臼法處死，並迅速取出全腦，去其腦幹及小腦，用水生理鹽漂洗，濾紙吸干後稱重，樣品以冰生理鹽水配製成20%勻漿液，4℃ 4 500 r/min離心5 min，取其上清液，按羥胺比色法進行Ach含量，Ach-E活性測定。
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