作者：王玉亮 呂晶 張磊 辛海量
【摘要】
目的研究水龍骨對人肝癌細胞株HepG2、SMMC-7721的生長增殖抑制作用。方法製備水龍骨含藥血清，用MTT法觀察細胞增殖情況。結果水龍骨含藥血清在體外對人肝癌細胞株HepG2、SMMC7721均有抑制作用，對HepG2的最高抑制率為87.4％，對SMMC7721的最高抑制率為85.9％，抑制肝癌細胞的效果優於含5-氟尿嘧啶血清。結論水龍骨對肝癌細胞的體外增殖有明顯的抑制作用。
【關鍵詞】 水龍骨； 人肝癌細胞株； 抗癌效應； 大耳白免； 含藥血清
Abstract：ObjectiveTo observe the inhibitory action of Polypodiodes niponica on the proliferation of HCC cell line HepG2,SMMC-7721 in vitro. MethodsThe serologic pharmacological method and MTT assay were used. ResultsPolypodiodes niponica had some inhibitory effect on tumor cell proliferation in vitro．The proliferation of HepG2、SMMC-7721 cells was obviously inhibited after bEing treated with Polypodiodes niponica. The highest inhibitory rate on HepG2 was 87.4％ and that of SMMC-7721 was 85.9％. ConclusionPolypodiodes niponica has obvious effect of inhibiting the proliferatory of HCC cell line.
Key words：Polypodiodes niponica; HCC cell line; Inhibition action; Rabbit; Pharmaceutic serum
水龍骨始載於《本草綱目拾遺》，以草石蠶名之《植物名實圖考》名之水龍骨，列入石草類，來源為水龍骨科植物水龍骨Polypodiodes niponica (Mett.) Ching的乾燥根莖，性味苦、涼，可化濕，清熱解毒，祛風通絡，治痧穢泄瀉、痢疾、淋病白濁、風痹腰痛、筋骨酸痛、跌打損傷等症［1,2］。 現代 藥理研究證實其具有抗炎和抗纖維化作用［3］。
筆者通過在江浙一帶大量的調研，發現水龍骨在當地 醫院 和民間被廣泛地用於 治療 慢性B型肝炎及其相關性肝癌和肝癌晚期腹水症，療效較好。為進一步確證其抗癌活性，本實驗應用血清藥 理學 方法，觀察其對人肝癌細胞增殖的抑制作用。
1 材料
1.1 試劑和設備 水龍骨藥材采自浙江天目山，經第二軍醫大學生藥教研室張漢民教授鑑定為水龍骨科植物水龍骨Polypodiodes niponica的乾燥根。藥材粉碎後過100目篩，70%乙醇滲漉提取，滲漉液濃縮至浸膏，4℃存放備用。DMEM培養液、胎牛血清、胰蛋白酶由美國Gibco公司提供，MTT及其他常用試劑購自美華公司。CO2培養箱購自德國Hereus，ST-360酶標儀購自科華公司 。
1.2 動物與細胞 日本大耳白兔購自上海斯萊克實驗動物中心，動物合格證號：SCXK（滬），雄性，體重(2.5±0.2) kg；人肝癌細胞株HepG2、SMMC-7721由第二軍醫大學藥理實驗室提供。
2 方法
2.1 含藥血清的製備 參考 文獻 ［4］的方法，動物隨機分成3組，每組3隻。空白組，生理鹽水每日灌胃；陽性組，5-氟尿嘧啶每日按100 mg/kg灌胃給藥；水龍骨組，每日按生藥量計10 g/kg灌胃。10 d後，於最後1次灌藥後1 h(灌藥前禁食12 h)，乙醚麻醉，頸動脈采血，無菌分離血清，經過56℃，30 min滅活後，置-20℃冰箱保存備用。
2.2 腫瘤細胞懸液製備 將凍存的人肝癌細胞HepG2、SMMC-7721按常規方法復甦，接種於含10％小牛血清的DMEM培養液中，傳代培養，至細胞呈指數生長期時，棄培養液，加入0.25％胰蛋白酶消化3 min，用DMEM培養液中止消化後棄去，重新加入含10％小牛血清的DMEM培養液吹打，調整細胞數為1×10/ml，接種於96孔培養板，每孔加細胞懸液90 μl。
2.3 MTT法檢測 將培養的細胞接種於96孔的培養板中，置於飽和濕度的CO2培養箱中繼續培養24 h（37℃、5％CO2），棄去培養液，然後每孔加入DMEM培養液70 μl，空白組加入不含藥的空白兔血清30 μl；陽性藥組加入含5-氟尿嘧啶血清30 μl；水龍骨組分3個劑量組：大劑量組加30μl兔含藥血清， 中劑量組加20 μl兔含藥血清及10 μl的小牛血清，小劑量組加10 μl兔含藥血清及20 μl的小牛血清。繼續培養24 h，每孔加入MTT溶液，37℃孵育4 h，吸去每孔中的培養液，每孔加入二甲基亞碸(DMSO)，振蕩後採用酶聯免疫反應檢測儀測定各孔OD值，測定波長為570 nm，調零孔只含有DMSO。所得各孔平均OD值按下述公式 計算 腫瘤細胞抑制率：抑制率(％)=(對照組平均OD值-給藥組平均OD值)/對照組平均OD值×100％。
2.4 統計學方法 數據以±s表示。進行t檢驗及方差分析。
【摘要】
目的研究水龍骨對人肝癌細胞株HepG2、SMMC-7721的生長增殖抑制作用。方法製備水龍骨含藥血清，用MTT法觀察細胞增殖情況。結果水龍骨含藥血清在體外對人肝癌細胞株HepG2、SMMC7721均有抑制作用，對HepG2的最高抑制率為87.4％，對SMMC7721的最高抑制率為85.9％，抑制肝癌細胞的效果優於含5-氟尿嘧啶血清。結論水龍骨對肝癌細胞的體外增殖有明顯的抑制作用。
【關鍵詞】 水龍骨； 人肝癌細胞株； 抗癌效應； 大耳白免； 含藥血清
Abstract：ObjectiveTo observe the inhibitory action of Polypodiodes niponica on the proliferation of HCC cell line HepG2,SMMC-7721 in vitro. MethodsThe serologic pharmacological method and MTT assay were used. ResultsPolypodiodes niponica had some inhibitory effect on tumor cell proliferation in vitro．The proliferation of HepG2、SMMC-7721 cells was obviously inhibited after bEing treated with Polypodiodes niponica. The highest inhibitory rate on HepG2 was 87.4％ and that of SMMC-7721 was 85.9％. ConclusionPolypodiodes niponica has obvious effect of inhibiting the proliferatory of HCC cell line.
Key words：Polypodiodes niponica; HCC cell line; Inhibition action; Rabbit; Pharmaceutic serum
水龍骨始載於《本草綱目拾遺》，以草石蠶名之《植物名實圖考》名之水龍骨，列入石草類，來源為水龍骨科植物水龍骨Polypodiodes niponica (Mett.) Ching的乾燥根莖，性味苦、涼，可化濕，清熱解毒，祛風通絡，治痧穢泄瀉、痢疾、淋病白濁、風痹腰痛、筋骨酸痛、跌打損傷等症［1,2］。 現代 藥理研究證實其具有抗炎和抗纖維化作用［3］。
筆者通過在江浙一帶大量的調研，發現水龍骨在當地 醫院 和民間被廣泛地用於 治療 慢性B型肝炎及其相關性肝癌和肝癌晚期腹水症，療效較好。為進一步確證其抗癌活性，本實驗應用血清藥 理學 方法，觀察其對人肝癌細胞增殖的抑制作用。
1 材料
1.1 試劑和設備 水龍骨藥材采自浙江天目山，經第二軍醫大學生藥教研室張漢民教授鑑定為水龍骨科植物水龍骨Polypodiodes niponica的乾燥根。藥材粉碎後過100目篩，70%乙醇滲漉提取，滲漉液濃縮至浸膏，4℃存放備用。DMEM培養液、胎牛血清、胰蛋白酶由美國Gibco公司提供，MTT及其他常用試劑購自美華公司。CO2培養箱購自德國Hereus，ST-360酶標儀購自科華公司 。
1.2 動物與細胞 日本大耳白兔購自上海斯萊克實驗動物中心，動物合格證號：SCXK（滬），雄性，體重(2.5±0.2) kg；人肝癌細胞株HepG2、SMMC-7721由第二軍醫大學藥理實驗室提供。
2 方法
2.1 含藥血清的製備 參考 文獻 ［4］的方法，動物隨機分成3組，每組3隻。空白組，生理鹽水每日灌胃；陽性組，5-氟尿嘧啶每日按100 mg/kg灌胃給藥；水龍骨組，每日按生藥量計10 g/kg灌胃。10 d後，於最後1次灌藥後1 h(灌藥前禁食12 h)，乙醚麻醉，頸動脈采血，無菌分離血清，經過56℃，30 min滅活後，置-20℃冰箱保存備用。
2.2 腫瘤細胞懸液製備 將凍存的人肝癌細胞HepG2、SMMC-7721按常規方法復甦，接種於含10％小牛血清的DMEM培養液中，傳代培養，至細胞呈指數生長期時，棄培養液，加入0.25％胰蛋白酶消化3 min，用DMEM培養液中止消化後棄去，重新加入含10％小牛血清的DMEM培養液吹打，調整細胞數為1×10/ml，接種於96孔培養板，每孔加細胞懸液90 μl。
2.3 MTT法檢測 將培養的細胞接種於96孔的培養板中，置於飽和濕度的CO2培養箱中繼續培養24 h（37℃、5％CO2），棄去培養液，然後每孔加入DMEM培養液70 μl，空白組加入不含藥的空白兔血清30 μl；陽性藥組加入含5-氟尿嘧啶血清30 μl；水龍骨組分3個劑量組：大劑量組加30μl兔含藥血清， 中劑量組加20 μl兔含藥血清及10 μl的小牛血清，小劑量組加10 μl兔含藥血清及20 μl的小牛血清。繼續培養24 h，每孔加入MTT溶液，37℃孵育4 h，吸去每孔中的培養液，每孔加入二甲基亞碸(DMSO)，振蕩後採用酶聯免疫反應檢測儀測定各孔OD值，測定波長為570 nm，調零孔只含有DMSO。所得各孔平均OD值按下述公式 計算 腫瘤細胞抑制率：抑制率(％)=(對照組平均OD值-給藥組平均OD值)/對照組平均OD值×100％。
2.4 統計學方法 數據以±s表示。進行t檢驗及方差分析。
收藏