摘要： 本論文樣品採集地於湛江近海海域，利用有機溶劑石油醚，三氯甲烷，正丁醇和乙酸乙酯提取海綿中的化學成分，用凝膠色譜（GPC），氣相—質譜聯用儀（GC/MS），高效液相和液質聯用儀等光譜技術進行鑑定，分析海綿含有的化學成分。實驗結果表明，此次採摘的海綿中含有多種化合物，並確實了其中Hexanedioic acid bis(2-ethyLhexyL) ester、 n-Hexadecanoic acid、 1,3-CycLopentanedione、2,4-dimethyL-，1,2-DithioLane-3-pentanoic acid Tetradecanoic acid五種化合物，26種化合物的分子量，但還有多種物質還有待進一步分析。
Abstract： In this study, we collected sponge sample from Zhanjiang offshore sea area, and sponge ingredient were extracted by organic solvent benzine, chloroform, normal butyl alcohol and ethyl acetate, and identified and analyzed with the spectroscopic technique such as gel permeation chromatography (GPC), gas chromatopraphy-mass spectrometry (GC/MS), liquid chromatograph-mass spectrometer (LC-MS). The data indicates that the sponge has many kinds of compound, and affirms five kinds of compound such as hexanedioic acid， bis(2-ethyLhexyL) ester，n-Hexadecanoic acid，1,3-CycLopentanedione, 2,4-dimethyL-，1,2-DithioLane-3-pentanoic acid, and 26 kinds of compound molecular wEights, but also has many kinds of matter also to wait for further analysis.
關鍵詞： 海綿；分離提純；化學成分
Key words： sponge; purification; chemical component
中圖分類號：O69文獻標識碼：A文章編號：1006-4311（2011）04-0199-04
0引言
海綿中含有豐富的生物活性物質。海綿(Marine sponge) 是屬於動物界、海綿動物門(spongia)的一類低等多細胞海洋生物。從海水、海底沉積土到海洋動植物,以及一些熱泉涌、水熱狹縫等,包羅萬象的生態圈,造就了海綿共附生微生物一個複雜多樣的群體,同時,產生了獨特的有別於陸地微生物的多種具有生物活性的次級代謝產物。本研究利用海南豐富的海綿資源，從中篩選出化合物，通過色譜、光譜分析技術鑑定其結構特徵，並分析其生物活性。有望篩選出結構與活性不同於其他海洋來源的化合物，為進一步開發新的海洋藥物提供生物資源，具有非常重要的意義。
1材料方法
1.1 材料樣品採集地：湛江近海海域。樣品處理：從海水中採摘健康的海綿樣品後，分別置於無菌塑料袋中，一般在2h內送回實驗室處理，不能及時送回實驗室的則放於冰盒內低溫短時間保存。
1.2 試劑與儀器
三氯甲烷分析醇廣州化學試劑廠產品
正丁醇分析醇廣州化學試劑廠產品
乙酸乙酯分析醇廣州化學試劑廠產品
石油醚分析醇天津市福晨化學試劑廠產品
10mL移液槍
HP6890/5973MSD 氣相色譜—質譜聯用儀
HPLC高效液相儀/胺基酸分析儀（Water 2487 duaLλ absorbance detector）
agiLent 1100-esquire hct液質聯用儀
GPC凝膠滲透色譜儀（分子量測試範圍：150—270，000）
真空乾燥箱DZX—3型（6020B）寧波海曙賽福實驗儀器廠
1.3 實驗方法
1.3．1 化合物的提取分離海綿用無菌海水浸洗3遍，然後擠干，以去除表面附著物及夾帶的海水微生物。用無菌剪刀進行解剖，用2mL 甘油保存。實驗時，用5mL 95%工業酒精浸取3次，每次24小時。提取物冷凍乾燥成白色粉末後，將濃縮物分散於5mL水中，再用各2mL，1.5mL，1.5mL石油醚分別提取三次，得可溶物5mL，再用極性逐漸增大的三氯甲烷，正丁醇，乙酸已脂以同樣的方法提取三次，各得可溶物5mL，提取余相水溶物5mL。
1.3.2 氣相—質譜聯用儀測定有機相分別取200μL用於氣相—質譜連用儀（GC/MS）進行測定分析。色譜條件為： 色譜柱 HP-FFAP（30m×0.25mm, 0.25μm）,60°C ，4°C/min→150°C， 6°C/min，250°C，進樣溫度 250°C，載氣 He，分流比 80：1，柱流量 1.0μm/min；質譜條件為：EI源，電離電壓 70ev，離子源溫度 230°C，掃描範圍 40-500aum，進氣量 1μL。
1.3.3 高效液相色譜測定有機相冷凍乾燥後用於高效液相及液質聯用儀進行測定分析。高效液相分析儀條件為：分離系統：WATERS 2695 separations moduLe，色譜柱：Waters C－18（3×15mm），柱溫：25±5℃，流動相：甲醇，水梯度洗脫，洗脫條件如表1。
檢 測 器：Waters 2487 duaL λ absorbance detector，檢測波長： 254nm，進樣量：6μL，控制系統：Waters empower 軟體。供試品溶液配製：正丁醇萃取液中加入800μL甲醇，三氯甲烷提取物、石油醚提取物以及乙酸乙酯提取物中加入1.3mL甲醇，混勻後以12000轉的轉速離心15min。取上層溶液待分析用。
1.3.4 液質聯用儀測定液質聯用儀分析條件為：儀器型號為agiLent 1100-esquire hct，色譜柱C18，內徑4.60*300mm，流動相甲醇+水梯度洗滌，洗脫條件如表2。
對水溶物做凝膠色譜分析，GPC的條件為：示差檢測器 Waters 1515+2414，兩根柱子串聯：型號分別是uLtrahydrogeLTM120和uLtrahydrogeLTM500，柱溫55℃，檢測器溫度50℃，流動相：水流速：0.6mL/min。
Abstract： In this study, we collected sponge sample from Zhanjiang offshore sea area, and sponge ingredient were extracted by organic solvent benzine, chloroform, normal butyl alcohol and ethyl acetate, and identified and analyzed with the spectroscopic technique such as gel permeation chromatography (GPC), gas chromatopraphy-mass spectrometry (GC/MS), liquid chromatograph-mass spectrometer (LC-MS). The data indicates that the sponge has many kinds of compound, and affirms five kinds of compound such as hexanedioic acid， bis(2-ethyLhexyL) ester，n-Hexadecanoic acid，1,3-CycLopentanedione, 2,4-dimethyL-，1,2-DithioLane-3-pentanoic acid, and 26 kinds of compound molecular wEights, but also has many kinds of matter also to wait for further analysis.
關鍵詞： 海綿；分離提純；化學成分
Key words： sponge; purification; chemical component
中圖分類號：O69文獻標識碼：A文章編號：1006-4311（2011）04-0199-04
0引言
海綿中含有豐富的生物活性物質。海綿(Marine sponge) 是屬於動物界、海綿動物門(spongia)的一類低等多細胞海洋生物。從海水、海底沉積土到海洋動植物,以及一些熱泉涌、水熱狹縫等,包羅萬象的生態圈,造就了海綿共附生微生物一個複雜多樣的群體,同時,產生了獨特的有別於陸地微生物的多種具有生物活性的次級代謝產物。本研究利用海南豐富的海綿資源，從中篩選出化合物，通過色譜、光譜分析技術鑑定其結構特徵，並分析其生物活性。有望篩選出結構與活性不同於其他海洋來源的化合物，為進一步開發新的海洋藥物提供生物資源，具有非常重要的意義。
1材料方法
1.1 材料樣品採集地：湛江近海海域。樣品處理：從海水中採摘健康的海綿樣品後，分別置於無菌塑料袋中，一般在2h內送回實驗室處理，不能及時送回實驗室的則放於冰盒內低溫短時間保存。
1.2 試劑與儀器
三氯甲烷分析醇廣州化學試劑廠產品
正丁醇分析醇廣州化學試劑廠產品
乙酸乙酯分析醇廣州化學試劑廠產品
石油醚分析醇天津市福晨化學試劑廠產品
10mL移液槍
HP6890/5973MSD 氣相色譜—質譜聯用儀
HPLC高效液相儀/胺基酸分析儀（Water 2487 duaLλ absorbance detector）
agiLent 1100-esquire hct液質聯用儀
GPC凝膠滲透色譜儀（分子量測試範圍：150—270，000）
真空乾燥箱DZX—3型（6020B）寧波海曙賽福實驗儀器廠
1.3 實驗方法
1.3．1 化合物的提取分離海綿用無菌海水浸洗3遍，然後擠干，以去除表面附著物及夾帶的海水微生物。用無菌剪刀進行解剖，用2mL 甘油保存。實驗時，用5mL 95%工業酒精浸取3次，每次24小時。提取物冷凍乾燥成白色粉末後，將濃縮物分散於5mL水中，再用各2mL，1.5mL，1.5mL石油醚分別提取三次，得可溶物5mL，再用極性逐漸增大的三氯甲烷，正丁醇，乙酸已脂以同樣的方法提取三次，各得可溶物5mL，提取余相水溶物5mL。
1.3.2 氣相—質譜聯用儀測定有機相分別取200μL用於氣相—質譜連用儀（GC/MS）進行測定分析。色譜條件為： 色譜柱 HP-FFAP（30m×0.25mm, 0.25μm）,60°C ，4°C/min→150°C， 6°C/min，250°C，進樣溫度 250°C，載氣 He，分流比 80：1，柱流量 1.0μm/min；質譜條件為：EI源，電離電壓 70ev，離子源溫度 230°C，掃描範圍 40-500aum，進氣量 1μL。
1.3.3 高效液相色譜測定有機相冷凍乾燥後用於高效液相及液質聯用儀進行測定分析。高效液相分析儀條件為：分離系統：WATERS 2695 separations moduLe，色譜柱：Waters C－18（3×15mm），柱溫：25±5℃，流動相：甲醇，水梯度洗脫，洗脫條件如表1。
檢 測 器：Waters 2487 duaL λ absorbance detector，檢測波長： 254nm，進樣量：6μL，控制系統：Waters empower 軟體。供試品溶液配製：正丁醇萃取液中加入800μL甲醇，三氯甲烷提取物、石油醚提取物以及乙酸乙酯提取物中加入1.3mL甲醇，混勻後以12000轉的轉速離心15min。取上層溶液待分析用。
1.3.4 液質聯用儀測定液質聯用儀分析條件為：儀器型號為agiLent 1100-esquire hct，色譜柱C18，內徑4.60*300mm，流動相甲醇+水梯度洗滌，洗脫條件如表2。
對水溶物做凝膠色譜分析，GPC的條件為：示差檢測器 Waters 1515+2414，兩根柱子串聯：型號分別是uLtrahydrogeLTM120和uLtrahydrogeLTM500，柱溫55℃，檢測器溫度50℃，流動相：水流速：0.6mL/min。
收藏