【摘要】［目的］ 探討環氧化酶2（COX-2）在肝細胞癌（HCC）、癌旁肝硬化和正常肝組織中的表達及其意義。［ 方法 ］ 應用 免疫組織化學法檢測30例HCC石蠟包埋組織、25例癌旁肝硬化組織及10例正常肝組織標本中COX-2的表達情況， 分析 其與肝細胞癌臨床病理特徵間的聯繫。［結果］ COX-2蛋白在HCC、癌旁肝硬化中表達陽性率分別為70.0%和92.0%，顯著高於在正常肝組織中的20.0%（P＜0.05），而COX-2在癌旁肝硬化組織中的表達高於HCC組織。COX-2蛋白在分化好HCC中的表達顯著高於分化差的HCC（P＜0.05），轉移組中COX-2蛋白表達顯著高於無轉移組（P＜0.01）；而COX-2蛋白的表達與腫瘤大小、有無包膜及AFP水平無關。［結論］ COX-2蛋白在肝細胞癌、癌旁肝硬化組織中高表達，表明COX-2可能在肝細胞癌的發生、 發展 過程中起著重要作用。
【關鍵詞】肝腫瘤
Expressions of Cyclooxygenase-2 in Hepatocellular Carcinoma Tissue and Carcinoma Adjacent Tissue with Cirrhosis
Abstract: ［Purpose］ To investigate the expressions and significance of cyclooxygenase-2(COX-2) in hepatocellular carcinoma tissue, carcinoma adjacent tissues with cirrhosis and normal liver tissue. ［Methods］ The expression of COX-2 in 30 case with hepatocellular carcinoma, 25 cases with carcinoma adjacent tissues with cirrhosis and 10 cases with normal liver tissues were detected by SP immunohistochemical staining. The relationship between the expression and clinicpathologic features in HCC was analyzed. ［Results］ The expression of COX-2 in hepatocellular carcinoma and its adjacent tissues with cirrhosis were 70.0% and 92.0% respectively, and they were higher than that in normal liver tissue (20.0%). The COX-2 expression in carcinoma adjacent tissues with cirrhosis was higher than that in HCC. Expression of COX-2 in well differential HCC was higher than that in poor differential HCC, and higher in case with metastasis than that without metastasis(P＜0.01).The expression of COX-2 in HCC did not relate to tumor size, tumor capsula and the level of AFP. ［Conclusion］ High expression of COX-2 in HCC and carcinoma adjacent tissues with cirrhosis indicates that the COX-2 expression might play an important role in carcinogenesis and progression of HCC.
Key words: hepatocellular neoplasms; cyclooxygenase-2; immunohistochemistry
環氧化酶（cyclooxygenase，COX）是催化花生四烯酸（arachidonic acid，AA）合成內源性前列腺素（prostaglandin，PG）的限速酶。COX-1是結構型酶，定位於內質網，在許多組織細胞中均有表達，參與維護組織細胞內環境穩定和調節正常組織細胞生理活動。COX-2是一種誘導酶，正常生理狀態下在多數組織檢測不到，當細胞受到某些刺激（生長因子、細胞因子和腫瘤促進劑）後，COX-2才開始表達，其活性可增加數十倍[1]，參與多種生理、病理過程。近年 研究 表明，COX-2不僅在炎症反應中起作用，還在許多腫瘤的發生、發展中發揮著重要作用[2]。本研究在檢測肝細胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC），癌旁肝硬化（paratumor cirrhosis，PC）及正常肝臟（normal liver，NL）組織中COX-2蛋白表達的基礎上，初步探討COX-2在肝細胞癌發生髮展中的作用及其意義。
1 材料與方法
1.1 材 料
選取中南大學湘雅三 醫院 病理科2004年~2005年期間的HCC石蠟包埋標本30例，其中男性24例，女性6例，男女之比為4∶1，年齡29~71歲，中位年齡51歲。腫瘤分化程度根據Edmondson法分為：Ⅰ級4例，Ⅱ級13例，Ⅲ級11例，Ⅳ級2例；腫瘤直徑＜5cm 16例，≥5cm 14例；腫瘤有包膜11例；伴門靜脈癌栓12例；甲胎蛋白（AFP）＜500μg/L 9例，≥500μg/L 21例。30例HCC標本中選取25例癌旁肝硬化組織標本，另選外傷所致的正常肝組織標本10例作為對照。
1.2 主要試劑
羊抗人COX-2多克隆抗體系Santa Cruz公司產品，抗體稀釋濃度為1∶100。鏈黴菌抗生物素蛋白—過氧化物酶免疫組化染色超敏試劑盒購至北京中山生物技術有限公司。
1.3 實驗方法
採用鏈黴菌抗生物素蛋白—過氧化物酶（streptavidin peroxidase，SP）免疫組化技術，石蠟包埋組織4μm連續切片，常規二甲苯脫蠟，梯度酒精水化，3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶10min；檸檬酸組織抗原修復液微波修復15min；過氧化酶阻斷液室溫下孵育10min；非免疫性動物血清室溫下孵育10min；滴加相應稀釋的一抗，4℃孵育過夜；PBS液沖洗後加生物素標記的二抗室溫下孵育10 min，加鏈親和素—過氧化物酶溶液孵育10min，PBS液沖洗，DAB染色，蘇木精復染，脫水、透明封片，光鏡下觀察。以PBS代替一抗作陰性對照，用已知陽性片作陽性對照。
1.4 結果判定
COX-2陽性信號為棕黃色或深棕黃色顆粒，定位於細胞漿，胞質無棕黃色或與背景著色一致為表達陰性細胞。在400倍光鏡下隨機觀察5個癌巢，根據COX-2陽性細胞占腫瘤細胞的比例來判斷，陽性細胞≤10%為陰性，陽性細胞＞10%為陽性。
1.5 統計學處理
所有數據均採用SPSS13.0軟體進行統計學處理。用χ2檢驗和Fisher確切機率法檢驗COX-2在不同組織間表達的差異及其與分化程度、轉移情況、腫瘤大小等的關係。檢驗水準α=0.05。
2 結 果
2.1 COX-2蛋白在肝細胞癌、癌旁肝硬化及正常肝組織中的表達
見表1。COX-2蛋白的陽性信號定位於肝癌細胞的細胞漿內，呈棕黃色顆粒狀（見圖1），其分布以廣泛性表達為主，偶見局灶性或散在性表達。檢測結果表明：COX-2蛋白在肝細胞癌中的表達率為70.0%，在癌旁肝硬化組織中的表達為92.0%，均明顯高於在正常肝組織中的表達（P＜0.05）；而癌旁肝硬化組織中COX-2的表達高於肝細胞癌中COX-2的表達（P=0.042）。
2.2 COX-2表達與肝細胞癌臨床病理特徵的關係
COX-2蛋白表達與HCC組織分化程度、腫瘤有無轉移有關，而與腫瘤大小、有無包膜及AFP水平無關，見表2。
3 討 論
近年研究表明，COX-2在大多數人類腫瘤中過表達，其過表達與乳腺癌、頭頸部腫瘤、肺癌、胃癌、結直腸癌等腫瘤的浸潤、淋巴結轉移和預後不良有關[3]。COX-2參與腫瘤發生、發展過程中的作用，機制包括：合成過多的前列腺素而刺激細胞增殖，促進腫瘤細胞的生長，抑制其凋亡[4]；促進腫瘤新生血管形成[5]；促進腫瘤的侵襲和轉移[6]；抑制免疫應答，使腫瘤細胞逃脫免疫監視[7]。此外，COX-2還有 自然 的過氧化酶活性，許多底物能被過氧化物酶氧化，生成的某些產物具有致癌性，能夠導致更多基因發生突變。
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