李雙石，張虎成，王鉑偉，蘭蓉，李浡
（北京電子科技職業學院生物工程學院，北京１０００２９）
摘要：酵母泥是葡萄酒釀造的主要副產物之一，廢酵母泥中富含谷胱甘肽等生物活性物質。通過單因素試驗和正交試驗，對葡萄酒廢酵母中的谷胱甘肽進行乙醇提取法工藝優化，確定最佳提取工藝條件為料液比１∶１０.0（m∶V）、乙醇體積分數３５％、浸提時間４５ ｍｉｎ和浸提溫度５０ ℃，在此條件下谷胱甘肽的得率可高達２２．１％。
關鍵詞 ：葡萄酒廢酵母；谷胱甘肽；乙醇提取法；工藝優化
中圖分類號：Ｑ８１文獻標識碼：A文章編號：0439－８114（２０15）03－0658-03
葡萄酒廢酵母是葡萄酒釀造的主要副產物之一，其排放量占葡萄酒產量的４％～５％［１］。葡萄酒酵母泥富含營養物質，將其直接排放，不僅會造成排水的生物耗氧量負荷，而且也會造成很大的資源浪費和環境污染。因此，葡萄酒廢酵母的高效再利用引起了國內外學者的關注。谷胱甘肽（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ＧＳＨ）是由Ｌ－谷氨酸、Ｌ－半胱氨酸和甘氨酸經肽鍵縮合而成，是一種同時具有γ－谷氨醯基和巰基的生物活性三肽化合物。ＧＳＨ具有多種生理功能，如作為抗氧化劑，可保護酶和其他蛋白質的巰基免受氧化，對部分外源毒性物質具有解毒作用，可治療肝損傷、延緩衰老、增強免疫力等。因此，ＧＳＨ在臨床醫學、食品添加劑和化妝品等行業的需求不斷增加，具有廣闊的市場前景［２］。谷胱甘肽在自然界中廣泛分布於動物、植物和微生物細胞內，其中以酵母、小麥胚芽和動物肝臟中含量較為豐富［２］。
目前，關於啤酒廢酵母［３－５］、麵包酵母［６，７］和玉米胚［８，９］的谷胱甘肽提取工藝研究較多，但利用葡萄酒廢酵母提取谷胱甘肽的研究尚未見報道。劉超等［７］分別採用熱水、乙醇、鹽酸提取麵包酵母中的ＧＳＨ，不同提取方法結果表明，乙醇提取法得到的ＧＳＨ提取率最高。舒嬡等［４］採用熱水和乙醇提取啤酒酵母中的ＧＳＨ，試驗結果表明乙醇提取法雖提取時間較長，但可大大縮短離心和濃縮時間，並且ＧＳＨ 損失少， 雜質含量較低。因此，本研究以葡萄酒廢酵母為原料，採用乙醇提取法製備ＧＳＨ，並對其提取工藝進行優化，以期為葡萄酒廢酵母資源的開發提供理論依據和技術參考。
１材料與方法
１．１材料、試劑與儀器
葡萄酒廢酵母泥：北京電子科技職業學院葡萄酒中試生產得到，采自２０１３年１１月。
還原型谷胱甘肽標準品，國藥集團化學試劑有限公司；５，５′－二硫代雙（２－硝基苯甲酸）（ＤＴＮＢ）：美國Ｓｉｇｍａ公司。
ＴＤＺ４Ａ－ＷＳ型低速自動平衡離心機，湖南湘儀離心機儀器有限公司；ＤＫ－Ｓ２４型電熱恆溫水浴鍋，上海精宏實驗設備有限公司；ＡＲ５１２０型天平，奧豪斯儀器（上海）有限公司；ＵＶ－１８００ＰＣ型紫外／可見分光光度計，上海美譜達儀器有限公司。
１．２方法
１．２．１葡萄酒廢棄酵母ＧＳＨ醇法提取將葡萄酒泥與去離子水以１∶１混合（體積比），用６０目篩篩分，４ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心２０ ｍｉｎ。重複上述步驟，直至所得沉澱為白色，上清液無色透明為止，收集沉澱，６０ ℃鼓風乾燥處理，磨粉。精確稱取１．０００ ０ ｇ葡萄酒廢酵母放入三角瓶中，加入一定量一定體積分數的乙醇溶液，在一定溫度下水浴處理一定時間，冷卻至室溫，以３ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ，取上清液，得到ＧＳＨ浸提液。
１．２．２ＧＳＨ含量的測定ＧＳＨ含量測定採用ＤＴＮＢ法［１０］。ＧＳＨ和ＤＴＮＢ反應生成黃色的５－硫代－２硝基苯甲酸，該物質在ｐＨ ８．０、４１２ ｎｍ波長處有最大吸收峰。
標準曲線的製作：取６支比色管，分別加入ＧＳＨ標準溶液（２００ ｍｇ／Ｌ） ０、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５ ｍＬ，補去離子水至０．５ ｍＬ，再加入ｐＨ ８．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液１．５ ｍＬ和３％甲醛溶液０．５ ｍＬ，混勻反應２ ｍｉｎ，然後加入ＤＴＮＢ分析液２．５ ｍＬ，置於２５ ℃水浴反應５ ｍｉｎ後，４１２ ｎｍ波長下測定吸光度。以吸光度Ａ為縱坐標，ＧＳＨ濃度Ｃ為橫坐標， 繪製標準曲線。
浸提液中ＧＳＨ含量測定：用０．５ ｍＬ ＧＳＨ浸提液代替ＧＳＨ標準溶液和水的混合物，用同樣的顯色方法測定浸提液中ＧＳＨ含量。
１．２．３單因素試驗設計分別對影響ＧＳＨ乙醇提取工藝的主要因素料液比、乙醇體積分數、浸提時間和浸提溫度進行單因素試驗，考察各因素對葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率的影響。
１）料液比對ＧＳＨ提取率的影響。稱取１．０００ ０ ｇ葡萄酒廢酵母５份，分別加入４０％乙醇溶液８、９、１０、１１、１２ ｍＬ（m∶V，下同），於５０ ℃水浴攪拌９０ ｍｉｎ，冷卻至室溫，離心，取上清，檢測ＧＳＨ濃度，計算ＧＳＨ提取率。
酵母谷胱甘肽提取率＝ＣＶｎ／ｍ×１００％
式中，Ｃ為粗提液中谷胱甘肽濃度，Ｖ為粗提液體積，ｎ為粗提液稀釋倍數，ｍ為葡萄酒廢酵母乾粉質量。
２）乙醇體積分數對ＧＳＨ提取率的影響。稱取１．０００ ０ ｇ酵母５份，分別加入１０ ｍＬ ２０％、３０％、４０％、５０％、６０％乙醇溶液，於５０ ℃水浴攪拌９０ ｍｉｎ，冷卻至室溫，離心，取上清液，檢測ＧＳＨ含量，並計算ＧＳＨ提取率。
３）浸提時間對ＧＳＨ提取率的影響。稱取１．０００ ０ ｇ酵母５份，分別添加４０％乙醇溶液１０ ｍＬ，於５０ ℃水浴攪拌３０、５０、７０、９０和１１０ ｍｉｎ，冷卻至室溫，離心後檢測上清液中ＧＳＨ含量，計算ＧＳＨ提取率。
４）浸提溫度對ＧＳＨ提取率的影響。稱取１．０００ ０ ｇ酵母５份，分別添加４０％乙醇溶液１０ ｍＬ，於３０、４０、５０、６０、７０ ℃下水浴攪拌５ ｈ，冷卻至室溫，離心，檢測上清液中ＧＳＨ含量，計算ＧＳＨ提取率。
１．２．４正交試驗條件優化根據單因素試驗結果確定葡萄酒廢酵母多糖提取正交試驗的因素和水平，如表１所示。採用４因素３水平的正交試驗設計，對葡萄酒廢酵母多糖提取工藝進行優化。
２結果與分析
２．１ＧＳＨ含量標準曲線的製作
採用ＤＴＮＢ法測定浸提液中ＧＳＨ含量，得到ＧＳＨ濃度Ｃ與吸光度Ａ的回歸方程為Ａ＝０．００３ ５Ｃ－０．００４ １（Ｒ２＝０．９９６ ５），標準曲線如圖１所示。
２．２單因素試驗結果
２．２．１料液比對葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率的影響由圖２可知，隨著料液比的增加，葡萄酒廢酵母ＧＳＨ浸提液中谷胱甘肽含量先緩慢增加，當料液比為１∶１０時谷胱甘肽提取率達到最大值，隨後又略有降低。這主要是由於當乙醇溶液用量不足時，酵母細胞壁沒有充分破碎，導致ＧＳＨ抽提不完全；但過量的乙醇溶液又容易造成ＧＳＨ氧化，導致ＧＳＨ提取率下降。因而，料液比初步確定採用１∶１０。
２．２．２乙醇體積分數對葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率的影響乙醇能增強酵母細胞膜類脂的流動性，可提高細胞的通透性，促進胞內物質釋放。由圖３可知，當乙醇體積分數小於３０％時，葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率隨乙醇體積分數增加明顯升高。但當乙醇體積分數大於３０％時，ＧＳＨ提取率隨乙醇體積分數增加略有下降，這是由於ＧＳＨ是一種易溶於水和稀醇，微溶於醇的活性肽［７］，乙醇的體積分數較大時反而不利於ＧＳＨ的提取。因此乙醇體積分數初步確定為３０％。
２．２．３浸提時間對葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率的影響由圖４可知，浸提時間在５０ ｍｉｎ時，葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率最大；超過５０ ｍｉｎ後，葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率呈緩慢的下降趨勢，這可能是由於ＧＳＨ在空氣中受到氧化不穩定，從而導致含量下降。因此，可初步確定谷胱甘肽浸提時間為５０ ｍｉｎ。
２．２．４浸提溫度對葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率的影響由圖５可知，隨著浸提溫度的升高，葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率呈先升後降的趨勢，在５０ ℃時達到最大值。這是由於浸提溫度對ＧＳＨ穩定性有較大影響，ＧＳＨ的氧化速度與溫度呈負相關［７］，高溫可破壞ＧＳＨ的活性；但浸提溫度如果過低，也將阻礙乙醇與酵母細胞壁和細胞膜的相互作用，不利於ＧＳＨ溶出。因此，初步確定５０ ℃為葡萄酒廢酵母ＧＳＨ的浸提溫度。
２．３正交試驗優化結果
在單因素試驗結果的基礎上，採用正交試驗設計對葡萄酒廢酵母多糖提取工藝條件進行優化，試驗結果如表２所示。由表２可知，用乙醇提取法製備葡萄酒廢酵母中谷胱甘肽的最佳工藝條件為料液比１∶１０.0、乙醇體積分數３５％、浸提時間４５ ｍｉｎ、浸提溫度５０ ℃，此條件下谷胱甘肽的提取率為２２．１％。
從表２的極差分析可知，各因素對谷胱甘肽提取的影響程度依次為Ｃ、Ａ、Ｄ、Ｂ，即浸提時間對谷胱甘肽提取率的影響最大，其次為浸提溫度和料液比，而乙醇體積分數的影響最小。
３結論
葡萄酒廢酵母中含有豐富的活性物質，谷胱甘肽為其中的一種活性多肽。本試驗通過單因素和正交試驗對葡萄酒廢酵母谷胱甘肽的提取工藝進行優化，確定最佳提取工藝條件為料液比１∶１０.0、乙醇體積分數３５％、浸提時間４５ ｍｉｎ、浸提溫度５０ ℃，在此條件下谷胱甘肽的提取率可達２２．１％。邵偉等［3］、凌秀梅等［5］從啤酒廢酵母中提取ＧＳＨ，ＧＳＨ提取率較高，分別為２３．３７％和２９％以上，這與原料、ＧＳＨ檢測方法不同有關。乙醇提取法是一種較溫和的提取方法，且具有工藝簡單、成本低廉、乙醇可回收再利用等特點，因此具有一定的應用前景。
參考文獻：
［１］ 杜娜，楊學山，韓舜愈，等．葡萄酒泥酵母超氧化物歧化酶分離提取工藝條件優化［Ｊ］．食品工業科技，２０１３，３４（１５）：２４２－２４５．
［２］ 冮潔，單立峰．谷胱甘肽的生產及其在食品工業中的應用［Ｊ］．中國調味品，２００９，３２（２）：４０－４４．
［３］ 邵偉，樂超銀，唐明，等．啤酒廢酵母中谷胱甘肽提取工藝條件優化研究［Ｊ］．食品科學，２００８，２９（５）：１７３－１７６．
［４］ 舒嬡，王家騏，朱立江，等．酵母中還原型谷胱甘肽的提取方法研究［Ｊ］．發酵科技通訊，２００８，３７（３）：１６－１９．
［５］ 凌秀梅，邱樹毅，胡鵬剛，等．響應面法優化從啤酒廢酵母中提取谷胱甘肽工藝條件［Ｊ］．中國釀造，２００７（７）：３５－３８，４４．
［６］ 陳娜，喬長晟，胡玉霞，等．麵包酵母中谷胱甘肽抽提方法的研究［Ｊ］．現代食品科技，２００８，２４（２）：１５７－１６0．
［７］ 劉超，袁建國，高艷華，等．酵母還原型谷胱甘肽提取條件的優化［Ｊ］．食品與藥品，２０１１（７）：２３４－２３７．
［８］ 王鑫，徐麗萍，李旭，等．玉米胚谷胱甘肽提取工藝的研究［Ｊ］．哈爾濱商業大學學報（自然科學版），２００９，２５（５）：５９０－５９２，６０３．
［９］ 徐麗萍，王鑫，邢超．溶劑法純化還原型谷胱甘肽工藝的研究［Ｊ］．食品工業科技，２０１１（１２）：３４８－３５０．
［１０］ 李從軍，謝愛娣．酵母提取液中谷胱甘肽定量測定方法的比較［Ｊ］．食品與發酵工業，２０１０，３６（７）：１５８－１６２．
（北京電子科技職業學院生物工程學院，北京１０００２９）
摘要：酵母泥是葡萄酒釀造的主要副產物之一，廢酵母泥中富含谷胱甘肽等生物活性物質。通過單因素試驗和正交試驗，對葡萄酒廢酵母中的谷胱甘肽進行乙醇提取法工藝優化，確定最佳提取工藝條件為料液比１∶１０.0（m∶V）、乙醇體積分數３５％、浸提時間４５ ｍｉｎ和浸提溫度５０ ℃，在此條件下谷胱甘肽的得率可高達２２．１％。
關鍵詞 ：葡萄酒廢酵母；谷胱甘肽；乙醇提取法；工藝優化
中圖分類號：Ｑ８１文獻標識碼：A文章編號：0439－８114（２０15）03－0658-03
葡萄酒廢酵母是葡萄酒釀造的主要副產物之一，其排放量占葡萄酒產量的４％～５％［１］。葡萄酒酵母泥富含營養物質，將其直接排放，不僅會造成排水的生物耗氧量負荷，而且也會造成很大的資源浪費和環境污染。因此，葡萄酒廢酵母的高效再利用引起了國內外學者的關注。谷胱甘肽（Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ，ＧＳＨ）是由Ｌ－谷氨酸、Ｌ－半胱氨酸和甘氨酸經肽鍵縮合而成，是一種同時具有γ－谷氨醯基和巰基的生物活性三肽化合物。ＧＳＨ具有多種生理功能，如作為抗氧化劑，可保護酶和其他蛋白質的巰基免受氧化，對部分外源毒性物質具有解毒作用，可治療肝損傷、延緩衰老、增強免疫力等。因此，ＧＳＨ在臨床醫學、食品添加劑和化妝品等行業的需求不斷增加，具有廣闊的市場前景［２］。谷胱甘肽在自然界中廣泛分布於動物、植物和微生物細胞內，其中以酵母、小麥胚芽和動物肝臟中含量較為豐富［２］。
目前，關於啤酒廢酵母［３－５］、麵包酵母［６，７］和玉米胚［８，９］的谷胱甘肽提取工藝研究較多，但利用葡萄酒廢酵母提取谷胱甘肽的研究尚未見報道。劉超等［７］分別採用熱水、乙醇、鹽酸提取麵包酵母中的ＧＳＨ，不同提取方法結果表明，乙醇提取法得到的ＧＳＨ提取率最高。舒嬡等［４］採用熱水和乙醇提取啤酒酵母中的ＧＳＨ，試驗結果表明乙醇提取法雖提取時間較長，但可大大縮短離心和濃縮時間，並且ＧＳＨ 損失少， 雜質含量較低。因此，本研究以葡萄酒廢酵母為原料，採用乙醇提取法製備ＧＳＨ，並對其提取工藝進行優化，以期為葡萄酒廢酵母資源的開發提供理論依據和技術參考。
１材料與方法
１．１材料、試劑與儀器
葡萄酒廢酵母泥：北京電子科技職業學院葡萄酒中試生產得到，采自２０１３年１１月。
還原型谷胱甘肽標準品，國藥集團化學試劑有限公司；５，５′－二硫代雙（２－硝基苯甲酸）（ＤＴＮＢ）：美國Ｓｉｇｍａ公司。
ＴＤＺ４Ａ－ＷＳ型低速自動平衡離心機，湖南湘儀離心機儀器有限公司；ＤＫ－Ｓ２４型電熱恆溫水浴鍋，上海精宏實驗設備有限公司；ＡＲ５１２０型天平，奧豪斯儀器（上海）有限公司；ＵＶ－１８００ＰＣ型紫外／可見分光光度計，上海美譜達儀器有限公司。
１．２方法
１．２．１葡萄酒廢棄酵母ＧＳＨ醇法提取將葡萄酒泥與去離子水以１∶１混合（體積比），用６０目篩篩分，４ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心２０ ｍｉｎ。重複上述步驟，直至所得沉澱為白色，上清液無色透明為止，收集沉澱，６０ ℃鼓風乾燥處理，磨粉。精確稱取１．０００ ０ ｇ葡萄酒廢酵母放入三角瓶中，加入一定量一定體積分數的乙醇溶液，在一定溫度下水浴處理一定時間，冷卻至室溫，以３ ０００ ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ，取上清液，得到ＧＳＨ浸提液。
１．２．２ＧＳＨ含量的測定ＧＳＨ含量測定採用ＤＴＮＢ法［１０］。ＧＳＨ和ＤＴＮＢ反應生成黃色的５－硫代－２硝基苯甲酸，該物質在ｐＨ ８．０、４１２ ｎｍ波長處有最大吸收峰。
標準曲線的製作：取６支比色管，分別加入ＧＳＨ標準溶液（２００ ｍｇ／Ｌ） ０、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５ ｍＬ，補去離子水至０．５ ｍＬ，再加入ｐＨ ８．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ緩衝液１．５ ｍＬ和３％甲醛溶液０．５ ｍＬ，混勻反應２ ｍｉｎ，然後加入ＤＴＮＢ分析液２．５ ｍＬ，置於２５ ℃水浴反應５ ｍｉｎ後，４１２ ｎｍ波長下測定吸光度。以吸光度Ａ為縱坐標，ＧＳＨ濃度Ｃ為橫坐標， 繪製標準曲線。
浸提液中ＧＳＨ含量測定：用０．５ ｍＬ ＧＳＨ浸提液代替ＧＳＨ標準溶液和水的混合物，用同樣的顯色方法測定浸提液中ＧＳＨ含量。
１．２．３單因素試驗設計分別對影響ＧＳＨ乙醇提取工藝的主要因素料液比、乙醇體積分數、浸提時間和浸提溫度進行單因素試驗，考察各因素對葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率的影響。
１）料液比對ＧＳＨ提取率的影響。稱取１．０００ ０ ｇ葡萄酒廢酵母５份，分別加入４０％乙醇溶液８、９、１０、１１、１２ ｍＬ（m∶V，下同），於５０ ℃水浴攪拌９０ ｍｉｎ，冷卻至室溫，離心，取上清，檢測ＧＳＨ濃度，計算ＧＳＨ提取率。
酵母谷胱甘肽提取率＝ＣＶｎ／ｍ×１００％
式中，Ｃ為粗提液中谷胱甘肽濃度，Ｖ為粗提液體積，ｎ為粗提液稀釋倍數，ｍ為葡萄酒廢酵母乾粉質量。
２）乙醇體積分數對ＧＳＨ提取率的影響。稱取１．０００ ０ ｇ酵母５份，分別加入１０ ｍＬ ２０％、３０％、４０％、５０％、６０％乙醇溶液，於５０ ℃水浴攪拌９０ ｍｉｎ，冷卻至室溫，離心，取上清液，檢測ＧＳＨ含量，並計算ＧＳＨ提取率。
３）浸提時間對ＧＳＨ提取率的影響。稱取１．０００ ０ ｇ酵母５份，分別添加４０％乙醇溶液１０ ｍＬ，於５０ ℃水浴攪拌３０、５０、７０、９０和１１０ ｍｉｎ，冷卻至室溫，離心後檢測上清液中ＧＳＨ含量，計算ＧＳＨ提取率。
４）浸提溫度對ＧＳＨ提取率的影響。稱取１．０００ ０ ｇ酵母５份，分別添加４０％乙醇溶液１０ ｍＬ，於３０、４０、５０、６０、７０ ℃下水浴攪拌５ ｈ，冷卻至室溫，離心，檢測上清液中ＧＳＨ含量，計算ＧＳＨ提取率。
１．２．４正交試驗條件優化根據單因素試驗結果確定葡萄酒廢酵母多糖提取正交試驗的因素和水平，如表１所示。採用４因素３水平的正交試驗設計，對葡萄酒廢酵母多糖提取工藝進行優化。
２結果與分析
２．１ＧＳＨ含量標準曲線的製作
採用ＤＴＮＢ法測定浸提液中ＧＳＨ含量，得到ＧＳＨ濃度Ｃ與吸光度Ａ的回歸方程為Ａ＝０．００３ ５Ｃ－０．００４ １（Ｒ２＝０．９９６ ５），標準曲線如圖１所示。
２．２單因素試驗結果
２．２．１料液比對葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率的影響由圖２可知，隨著料液比的增加，葡萄酒廢酵母ＧＳＨ浸提液中谷胱甘肽含量先緩慢增加，當料液比為１∶１０時谷胱甘肽提取率達到最大值，隨後又略有降低。這主要是由於當乙醇溶液用量不足時，酵母細胞壁沒有充分破碎，導致ＧＳＨ抽提不完全；但過量的乙醇溶液又容易造成ＧＳＨ氧化，導致ＧＳＨ提取率下降。因而，料液比初步確定採用１∶１０。
２．２．２乙醇體積分數對葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率的影響乙醇能增強酵母細胞膜類脂的流動性，可提高細胞的通透性，促進胞內物質釋放。由圖３可知，當乙醇體積分數小於３０％時，葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率隨乙醇體積分數增加明顯升高。但當乙醇體積分數大於３０％時，ＧＳＨ提取率隨乙醇體積分數增加略有下降，這是由於ＧＳＨ是一種易溶於水和稀醇，微溶於醇的活性肽［７］，乙醇的體積分數較大時反而不利於ＧＳＨ的提取。因此乙醇體積分數初步確定為３０％。
２．２．３浸提時間對葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率的影響由圖４可知，浸提時間在５０ ｍｉｎ時，葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率最大；超過５０ ｍｉｎ後，葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率呈緩慢的下降趨勢，這可能是由於ＧＳＨ在空氣中受到氧化不穩定，從而導致含量下降。因此，可初步確定谷胱甘肽浸提時間為５０ ｍｉｎ。
２．２．４浸提溫度對葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率的影響由圖５可知，隨著浸提溫度的升高，葡萄酒廢酵母ＧＳＨ提取率呈先升後降的趨勢，在５０ ℃時達到最大值。這是由於浸提溫度對ＧＳＨ穩定性有較大影響，ＧＳＨ的氧化速度與溫度呈負相關［７］，高溫可破壞ＧＳＨ的活性；但浸提溫度如果過低，也將阻礙乙醇與酵母細胞壁和細胞膜的相互作用，不利於ＧＳＨ溶出。因此，初步確定５０ ℃為葡萄酒廢酵母ＧＳＨ的浸提溫度。
２．３正交試驗優化結果
在單因素試驗結果的基礎上，採用正交試驗設計對葡萄酒廢酵母多糖提取工藝條件進行優化，試驗結果如表２所示。由表２可知，用乙醇提取法製備葡萄酒廢酵母中谷胱甘肽的最佳工藝條件為料液比１∶１０.0、乙醇體積分數３５％、浸提時間４５ ｍｉｎ、浸提溫度５０ ℃，此條件下谷胱甘肽的提取率為２２．１％。
從表２的極差分析可知，各因素對谷胱甘肽提取的影響程度依次為Ｃ、Ａ、Ｄ、Ｂ，即浸提時間對谷胱甘肽提取率的影響最大，其次為浸提溫度和料液比，而乙醇體積分數的影響最小。
３結論
葡萄酒廢酵母中含有豐富的活性物質，谷胱甘肽為其中的一種活性多肽。本試驗通過單因素和正交試驗對葡萄酒廢酵母谷胱甘肽的提取工藝進行優化，確定最佳提取工藝條件為料液比１∶１０.0、乙醇體積分數３５％、浸提時間４５ ｍｉｎ、浸提溫度５０ ℃，在此條件下谷胱甘肽的提取率可達２２．１％。邵偉等［3］、凌秀梅等［5］從啤酒廢酵母中提取ＧＳＨ，ＧＳＨ提取率較高，分別為２３．３７％和２９％以上，這與原料、ＧＳＨ檢測方法不同有關。乙醇提取法是一種較溫和的提取方法，且具有工藝簡單、成本低廉、乙醇可回收再利用等特點，因此具有一定的應用前景。
參考文獻：
［１］ 杜娜，楊學山，韓舜愈，等．葡萄酒泥酵母超氧化物歧化酶分離提取工藝條件優化［Ｊ］．食品工業科技，２０１３，３４（１５）：２４２－２４５．
［２］ 冮潔，單立峰．谷胱甘肽的生產及其在食品工業中的應用［Ｊ］．中國調味品，２００９，３２（２）：４０－４４．
［３］ 邵偉，樂超銀，唐明，等．啤酒廢酵母中谷胱甘肽提取工藝條件優化研究［Ｊ］．食品科學，２００８，２９（５）：１７３－１７６．
［４］ 舒嬡，王家騏，朱立江，等．酵母中還原型谷胱甘肽的提取方法研究［Ｊ］．發酵科技通訊，２００８，３７（３）：１６－１９．
［５］ 凌秀梅，邱樹毅，胡鵬剛，等．響應面法優化從啤酒廢酵母中提取谷胱甘肽工藝條件［Ｊ］．中國釀造，２００７（７）：３５－３８，４４．
［６］ 陳娜，喬長晟，胡玉霞，等．麵包酵母中谷胱甘肽抽提方法的研究［Ｊ］．現代食品科技，２００８，２４（２）：１５７－１６0．
［７］ 劉超，袁建國，高艷華，等．酵母還原型谷胱甘肽提取條件的優化［Ｊ］．食品與藥品，２０１１（７）：２３４－２３７．
［８］ 王鑫，徐麗萍，李旭，等．玉米胚谷胱甘肽提取工藝的研究［Ｊ］．哈爾濱商業大學學報（自然科學版），２００９，２５（５）：５９０－５９２，６０３．
［９］ 徐麗萍，王鑫，邢超．溶劑法純化還原型谷胱甘肽工藝的研究［Ｊ］．食品工業科技，２０１１（１２）：３４８－３５０．
［１０］ 李從軍，謝愛娣．酵母提取液中谷胱甘肽定量測定方法的比較［Ｊ］．食品與發酵工業，２０１０，３６（７）：１５８－１６２．
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