作者：林紅景 吳小娟 唐 前 石海峰 唐玲 馮寶民 王永奇
【摘要】 目的優選南山茶子中總黃酮的提取工藝。方法採用乙醇-水法從南山茶子中提取總黃酮，利用正交實驗優選總黃酮最佳提取工藝，考察乙醇濃度、時間、溫度、浸提次數及料液比對總黃酮收率的影響。結果總黃酮的最佳提取工藝為：20倍量70%乙醇-水在80℃下提取兩次，2.5 h/次，總黃酮的收率為3.42%，總黃酮含量為18.55%。結論醇水提取法可用於南山茶子中總黃酮的提取，其中料液比對總黃酮的提取影響較大。
【關鍵詞】 南山茶種子 總黃酮 提取工藝 正交實驗
南山茶為山茶科（Theaceae）山茶屬（Camellia）植物，分布於廣西的東南部至廣東西南部，海拔250～500 m的山地，資源豐富。我們前期的實驗研究推斷南山茶種子中的黃酮類化合物為抗骨質疏鬆的有效成分，故本研究在單因素的基礎上，以南山茶種子中總黃酮收率為指標，利用正交實驗優化總黃酮的提取工藝。
1 儀器與試藥
1.1 儀器Unico 7200可見分光光度計（尤尼柯上海儀器有限公司）；Laborata4000型旋轉蒸發儀（HEidolph公司）；BP210S十萬分之一 電子 天平（Sartorius公司）；水浴鍋HH4（國華電器有限公司）；真空乾燥箱DZF6021型（上海精宏實驗設備有限公司）；循環水工真空泵SHZD（鞏義市英峪聖華儀器廠）。
1.2 試藥南山茶種子Camellia semiserrata Chi.於200603採集於廣西省平南縣六陳鎮，由中科院昆明植物所裴盛基教授鑑定；對照品（山奈酚3OβD葡萄糖基（6→1）2'''， 4'''O二乙醯基αL鼠李糖基（3→1）2''''， 3''''， 4''''O三乙醯基αL鼠李糖苷），由本實驗室從南山茶種子中分離得到；所用試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 總黃酮的測定［1］
2.1.1 標準曲線的繪製 精確稱取乾燥至恆重的對照品20 mg，置100 ml容量瓶中，加入甲醇溶解並稀釋到刻度，搖勻，得濃度為0.2 mg/ml的對照品溶液，備用。精密吸取對照品溶液 0.00，0.30，0.60，0.90，1.20，1.50 ml，各加甲醇至4.0 ml，再分別加入質量分數為5%的NaNO2溶液0.3 ml，搖勻，室溫放置6 min，再加10% AlCl3溶液0.3 ml，搖勻，室溫放置10 min，在400 nm波長下測定吸光度A，同時以試劑空白做參比。以吸光度A為縱坐標，濃度C（mg/ml）為橫坐標，繪製標準曲線。得到回歸方程 A=15.065C+0.002 6，R2=0.999 9； 線性範圍：0.013～0.065 2 mg/ml。
2.1.2 樣品溶液的測定準確稱取10.0 g南山茶種粕，粉碎，於500ml圓底燒瓶中，按實驗設置的處理條件提取，在旋轉蒸發儀上濃縮成膏狀後於60℃真空乾燥箱中乾燥至恆重，準確稱取乾燥粉末20 mg用甲醇溶解，定容至10 ml容量瓶中，準確吸取一定量置於具塞試管中，照「2.1.1」項下自「各加甲醇至4.0ml」後同法測定吸光度。代入回歸方程中 計算 總黃酮的含量，並計算總黃酮的收率〔總黃酮收率（%）=提取液中總黃酮質量/南山茶種粕質量×100%〕。
2.2 單因素實驗［2］
2.2.1 提取溶劑的濃度對總黃酮收率的影響在恆定浸提時間為2 h，浸提溫度為100℃，提取次數為3次、料液比為1:10的條件下，分設60%，70%，80%，90%共4個提取濃度進行提取，計算南山茶種子中總黃酮的收率（見圖1）。隨著乙醇濃度的增加，總黃酮的收率增加，當乙醇濃度為70%時總黃酮的收率最高，但隨著乙醇濃度的繼續增加，總黃酮的收率明顯降低，可能是由於70%乙醇水溶液對總黃酮溶解性能好﹑對原料的溶脹係數高的原因，故選提取溶劑為70%乙醇水。
【摘要】 目的優選南山茶子中總黃酮的提取工藝。方法採用乙醇-水法從南山茶子中提取總黃酮，利用正交實驗優選總黃酮最佳提取工藝，考察乙醇濃度、時間、溫度、浸提次數及料液比對總黃酮收率的影響。結果總黃酮的最佳提取工藝為：20倍量70%乙醇-水在80℃下提取兩次，2.5 h/次，總黃酮的收率為3.42%，總黃酮含量為18.55%。結論醇水提取法可用於南山茶子中總黃酮的提取，其中料液比對總黃酮的提取影響較大。
【關鍵詞】 南山茶種子 總黃酮 提取工藝 正交實驗
南山茶為山茶科（Theaceae）山茶屬（Camellia）植物，分布於廣西的東南部至廣東西南部，海拔250～500 m的山地，資源豐富。我們前期的實驗研究推斷南山茶種子中的黃酮類化合物為抗骨質疏鬆的有效成分，故本研究在單因素的基礎上，以南山茶種子中總黃酮收率為指標，利用正交實驗優化總黃酮的提取工藝。
1 儀器與試藥
1.1 儀器Unico 7200可見分光光度計（尤尼柯上海儀器有限公司）；Laborata4000型旋轉蒸發儀（HEidolph公司）；BP210S十萬分之一 電子 天平（Sartorius公司）；水浴鍋HH4（國華電器有限公司）；真空乾燥箱DZF6021型（上海精宏實驗設備有限公司）；循環水工真空泵SHZD（鞏義市英峪聖華儀器廠）。
1.2 試藥南山茶種子Camellia semiserrata Chi.於200603採集於廣西省平南縣六陳鎮，由中科院昆明植物所裴盛基教授鑑定；對照品（山奈酚3OβD葡萄糖基（6→1）2'''， 4'''O二乙醯基αL鼠李糖基（3→1）2''''， 3''''， 4''''O三乙醯基αL鼠李糖苷），由本實驗室從南山茶種子中分離得到；所用試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 總黃酮的測定［1］
2.1.1 標準曲線的繪製 精確稱取乾燥至恆重的對照品20 mg，置100 ml容量瓶中，加入甲醇溶解並稀釋到刻度，搖勻，得濃度為0.2 mg/ml的對照品溶液，備用。精密吸取對照品溶液 0.00，0.30，0.60，0.90，1.20，1.50 ml，各加甲醇至4.0 ml，再分別加入質量分數為5%的NaNO2溶液0.3 ml，搖勻，室溫放置6 min，再加10% AlCl3溶液0.3 ml，搖勻，室溫放置10 min，在400 nm波長下測定吸光度A，同時以試劑空白做參比。以吸光度A為縱坐標，濃度C（mg/ml）為橫坐標，繪製標準曲線。得到回歸方程 A=15.065C+0.002 6，R2=0.999 9； 線性範圍：0.013～0.065 2 mg/ml。
2.1.2 樣品溶液的測定準確稱取10.0 g南山茶種粕，粉碎，於500ml圓底燒瓶中，按實驗設置的處理條件提取，在旋轉蒸發儀上濃縮成膏狀後於60℃真空乾燥箱中乾燥至恆重，準確稱取乾燥粉末20 mg用甲醇溶解，定容至10 ml容量瓶中，準確吸取一定量置於具塞試管中，照「2.1.1」項下自「各加甲醇至4.0ml」後同法測定吸光度。代入回歸方程中 計算 總黃酮的含量，並計算總黃酮的收率〔總黃酮收率（%）=提取液中總黃酮質量/南山茶種粕質量×100%〕。
2.2 單因素實驗［2］
2.2.1 提取溶劑的濃度對總黃酮收率的影響在恆定浸提時間為2 h，浸提溫度為100℃，提取次數為3次、料液比為1:10的條件下，分設60%，70%，80%，90%共4個提取濃度進行提取，計算南山茶種子中總黃酮的收率（見圖1）。隨著乙醇濃度的增加，總黃酮的收率增加，當乙醇濃度為70%時總黃酮的收率最高，但隨著乙醇濃度的繼續增加，總黃酮的收率明顯降低，可能是由於70%乙醇水溶液對總黃酮溶解性能好﹑對原料的溶脹係數高的原因，故選提取溶劑為70%乙醇水。
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