吳建耀 周桂生 龔 萍 余淑芳
崑山周市人民醫院檢驗科，江蘇崑山 215314
[摘要] 目的 探究溶痰液塗片法在痰液的抗酸桿菌檢測中的意義和價值。方法 收集2011年6月—2013年6月期間於該院檢驗科痰液檢查者的痰標本共計1100份，將每一份樣本同時進行直接塗片法和溶痰液塗片法來檢測痰標本中的抗酸桿菌，檢測兩種方法對抗酸桿菌的陽性檢測率。結果 溶痰液塗片法的陽性率為3.09%，直接塗片法陽性率為1.36%，前者明顯高於後者，其差異具有統計學意義（P＜0.05）。並且各種痰液的檢出率和陽性等級都高於直接塗片法。 結論 在結核病的抗酸桿菌的檢測方法中，溶痰液塗片法陽性檢測率明顯優於直接塗片法，可以作為快速診斷結核病的方法和手段，值得在臨床上推廣應用。
關鍵詞 直接塗片法；溶痰液塗片法；抗酸桿菌
[中圖分類號] R [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-074２（２０１5）01（b）－０180-02
結核病是指由於結核桿菌引起的慢性感染性疾病，主要的傳播途徑是呼吸道、消化道、皮膚以及子宮，其中最主要是通過呼吸道，主要的臨床表現是午後低熱、乏力。現今結核病仍舊嚴重地危害著人類的健康[1]。當前對肺結核患者進行細菌學檢查是發現和檢測傳染源最主要的途徑，這也是肺結核患者在確定診斷和治療方案的重要依據[2]。該研究通過回顧性分析2011年6月—2013年6月期間該院住院以及門診肺結核患者痰液通過直接塗片法和溶痰液塗片法檢測結果的差異，從而探究溶痰液在抗酸桿菌檢測中的意義和價值，現報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
來該院檢查患者在不同時間段（晨痰、即時痰和夜間痰）以及不同性質（唾液痰、黏液痰、血痰和膿性痰）的痰標本共計1100份。
1．2 方法與儀器
直接塗片法:將合格的痰液標本3 mL左右置於標本盒或者廣口容器內，將其中0.1 mL左右的膿樣痰液、乾酪樣的痰液用竹籤挑取，放置在一塊乾淨的載玻片中央，均勻地塗抹為2×2.5 cm大小的卵圓形痰膜。痰液自然乾燥、固定、染色以後進行鏡檢。
溶痰劑塗片法:將合格的痰液標本10 mL左右置於消毒後的廣口容器內，加入5倍的無菌蒸餾水，121 MPa高壓蒸汽滅菌20 min後，將痰檢體和BASO溶痰劑以1：2或者1：3的比例混合均勻，靜置10~20 min，待檢體完全融化後，於10 000轉/min下離心，除去上清液，取沉澱塗片染色後進行鏡檢。該研究所採用的染色方法為最常用的Ziehl-Neelsen抗酸染色法[3]；經過染色以後抗酸桿菌為紅色，其他細菌和背景則被染成了藍色。
1．3 觀察指標
根據《中國結核病防治規劃實施工作指南》[4]中有關鏡檢和報告標準進行報告，具體如下：(1)鏡下計數一百個視野，並且觀察的時間不能低於4 min，沒有發現抗酸桿菌，繼續觀察連續三百個視野，仍然沒有發現有抗酸桿菌，則報告為抗酸桿菌陰性，用「-」來表示。(2)鏡檢100~300個視野，若發現有1~2條抗酸桿菌，則記錄下所發現的抗酸桿菌的條數以及觀察的的視野數，報告為抗酸桿菌可疑（±）。並且對標本進行複查，重新塗片。(3)鏡檢小於100個視野，發現有3~9條AFB，則記錄下100個視野內抗酸桿菌的數目，報告為抗酸桿菌陽性（1+）。(4)鏡檢小於10個視野發現有1~9條抗酸桿菌則報告為抗酸桿菌陽性（2+）。(5)若鏡檢每個視野都發現有1~9條抗酸桿菌則報告為抗酸桿菌陽陽性（3+）。(6)若鏡檢每個視野發現的抗酸桿菌數量都大於9條，則報告為抗酸桿菌陽性（4+）[5]。
1．4 統計方法
該研究採用spss16.0統計學軟體對所得的數據進行整理分析，計量資料均數±標準差（x±s）表示，採用t檢驗；計數資料採用χ2檢驗。檢驗標準α=0.05。
2 結果
2.1 痰標本檢測結果
2011年6月—2013年6月期間來該院檢查患者的痰標本共計1100份，不同的去痰時間段以及標本性質檢測，見表1。
2.2 兩種不同塗片方法對1100份痰液標鏡檢結果
直接塗片法對1100份痰液鏡檢陽性率為1.36%（15/1100）,而溶痰液塗片法進行鏡檢陽性率為3.09%（35/1100）,溶痰液塗片法的陽性率要明顯高於直接塗片法，兩種方法陽性檢測率差異有統計學意義（χ2=16.432，P < 0.05），見表2；即時痰、夜間痰、晨痰痰液標本利用直接塗片法其陽性檢測率分別為0.75%、1.30%、2.69%，而利用溶痰劑塗片法其鏡檢陽性檢測率分別為1.5%、2.60%、6.15%。溶痰液塗片法對不同性質的痰液標本鏡檢陽性率要明顯高於直接塗片法,差異有統計學意義（χ2=16.432，P<0.05），見表3。
3 討論
直接塗片法由上個世紀開始廣泛應用，到目前為止仍然是檢測結核病菌的主要方法之一。直接塗片法用於檢測抗酸桿菌得優點有報告時間短、成本低廉、技術相對簡單、特異性高[6]，但是直接塗片法所使用的檢體大多都沒有經過處理，而是直接做成抹片，進行染色工作，因此準確性較低，而未經過處理的痰液檢體在烘乾的過程中，陽性患者痰液中殘存的肺結核菌很容易被蒸發到空氣中，這樣就可能會造成周圍人員以及操作者的感染。而Baso溶痰劑能夠迅速地溶解痰液中的上皮細胞、粘液，而且也可以滅活非分支桿菌，這樣能夠減少鏡檢時的干擾，顯著地提高陽性檢測率，降低偽陽性的發生率[7-8]。
該研究結果表明，雖然規定唾液是不合格的標本，應該要求病人重新送檢黏液痰、膿性痰標本，但是通過檢測發現口水和唾液中存在著抗酸桿菌，所以在工作者對於少痰或者確實無痰的正常體檢人員和患者，為了臨床診斷的需要以及避免矛盾，也可以接受唾液痰，此外在必要時可以採取超聲霧化取痰[9-10]。直接塗片法共檢測出15份抗酸菌陽性標本，陽性率為1.36%，而溶痰劑塗片法共檢測出34份抗酸菌標本，陽性率為3.09%。溶痰液塗片法的陽性率要明顯高於直接塗片法，並且陽性等級也要高於直接塗片法。直接塗片法和溶痰液法對血痰、膿性痰、黏液痰、唾液痰痰液標本進行檢測其陽性率分別為：（3.06% vs 9.18%）、（2.63% vs 4.61%）、（1.18% vs 1.85%）、（0.78% vs 2.74%）；直接塗片法和溶痰液法對即時痰、夜間痰、晨痰痰液標本進行檢測其陽性率分別為（0.75% vs 1.5 %）、（1.30 vs 2.60%）、（2.69% vs 6.15%）。這表明對於不同性質的痰液標本以及不同時間段的痰液標本，溶痰液塗片法陽性檢查率均要優於直接塗片法。
綜上所述，在結核病的抗酸桿菌的檢測方法中，溶痰液塗片法陽性檢測率明顯優於直接塗片法，可以作為快速診斷結核病的方法和工具，值得在臨床上推廣應用。
參考文獻
[1] 黃志強，張日東，吳智龍，等.新型改良羅氏培養基與羅氏酸基檢測結核分枝桿菌比較[J].廣東醫學，2011，32（9）：1152-1153.
[2] 潘美玉，吳龍章，陳劍鋒，等.兩種不同固體培養基對結核分枝桿菌培養陽性率的影響[J].實用醫學雜誌，2012，28（5）：830-831.
[3] 簡子娟，胡培磊，楊華林，等.夾層杯集菌離心塗片法與改良羅氏培養法檢測抗酸桿菌的比較[J].中國感染控制雜誌，2011，10（1）：26-29.
[4] 劉振江，庫爾巴尼克·皮拉尼克.影響結核菌生長的因素探討[J].臨床和實驗醫學雜誌，2011，10（19）：1552-1553.
[5] 蔡杏珊，謝敏娜，羅春明，等.MGTT及BaCT/AlertMP液體培養基檢測分枝桿菌效果的評價[J].國際檢驗醫學雜誌，2011，32（21）：2469-2471.
[6] 張進興，李小永，周笑珍.結核分枝桿菌檢測陽性報告時間探討-羅氏培養、7H9培養及MPB64膠體金法[J].中國醫學檢驗雜誌，2011，12（5）：210-211.
[7] 肖靜，楊元好，金瑛，等．螢光染色法檢測痰中結核桿菌的應用[J].貴陽中醫學學院學報，2013，35(4):152-153．
[8] 張小芬，曾希鵬，劉平．螢光染色LED顯微鏡查找痰中結核桿菌的應用[J].中國衛生檢驗雜誌，2010，20(12):3286-3287．
[9] 王愛輝，李艷靜，常占平，等.肺結核合併糖尿病患者T淋巴細胞亞群檢測的臨床意義[J].中國綜合臨床，2013,29（z1）：49-51.
[10] 周建華.痰塗片法與痰培養法檢測抗酸桿菌結果比較[J].中國鄉村醫藥，2013,20(5):55.
（收稿日期：2014-10-15）
崑山周市人民醫院檢驗科，江蘇崑山 215314
[摘要] 目的 探究溶痰液塗片法在痰液的抗酸桿菌檢測中的意義和價值。方法 收集2011年6月—2013年6月期間於該院檢驗科痰液檢查者的痰標本共計1100份，將每一份樣本同時進行直接塗片法和溶痰液塗片法來檢測痰標本中的抗酸桿菌，檢測兩種方法對抗酸桿菌的陽性檢測率。結果 溶痰液塗片法的陽性率為3.09%，直接塗片法陽性率為1.36%，前者明顯高於後者，其差異具有統計學意義（P＜0.05）。並且各種痰液的檢出率和陽性等級都高於直接塗片法。 結論 在結核病的抗酸桿菌的檢測方法中，溶痰液塗片法陽性檢測率明顯優於直接塗片法，可以作為快速診斷結核病的方法和手段，值得在臨床上推廣應用。
關鍵詞 直接塗片法；溶痰液塗片法；抗酸桿菌
[中圖分類號] R [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-074２（２０１5）01（b）－０180-02
結核病是指由於結核桿菌引起的慢性感染性疾病，主要的傳播途徑是呼吸道、消化道、皮膚以及子宮，其中最主要是通過呼吸道，主要的臨床表現是午後低熱、乏力。現今結核病仍舊嚴重地危害著人類的健康[1]。當前對肺結核患者進行細菌學檢查是發現和檢測傳染源最主要的途徑，這也是肺結核患者在確定診斷和治療方案的重要依據[2]。該研究通過回顧性分析2011年6月—2013年6月期間該院住院以及門診肺結核患者痰液通過直接塗片法和溶痰液塗片法檢測結果的差異，從而探究溶痰液在抗酸桿菌檢測中的意義和價值，現報道如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料
來該院檢查患者在不同時間段（晨痰、即時痰和夜間痰）以及不同性質（唾液痰、黏液痰、血痰和膿性痰）的痰標本共計1100份。
1．2 方法與儀器
直接塗片法:將合格的痰液標本3 mL左右置於標本盒或者廣口容器內，將其中0.1 mL左右的膿樣痰液、乾酪樣的痰液用竹籤挑取，放置在一塊乾淨的載玻片中央，均勻地塗抹為2×2.5 cm大小的卵圓形痰膜。痰液自然乾燥、固定、染色以後進行鏡檢。
溶痰劑塗片法:將合格的痰液標本10 mL左右置於消毒後的廣口容器內，加入5倍的無菌蒸餾水，121 MPa高壓蒸汽滅菌20 min後，將痰檢體和BASO溶痰劑以1：2或者1：3的比例混合均勻，靜置10~20 min，待檢體完全融化後，於10 000轉/min下離心，除去上清液，取沉澱塗片染色後進行鏡檢。該研究所採用的染色方法為最常用的Ziehl-Neelsen抗酸染色法[3]；經過染色以後抗酸桿菌為紅色，其他細菌和背景則被染成了藍色。
1．3 觀察指標
根據《中國結核病防治規劃實施工作指南》[4]中有關鏡檢和報告標準進行報告，具體如下：(1)鏡下計數一百個視野，並且觀察的時間不能低於4 min，沒有發現抗酸桿菌，繼續觀察連續三百個視野，仍然沒有發現有抗酸桿菌，則報告為抗酸桿菌陰性，用「-」來表示。(2)鏡檢100~300個視野，若發現有1~2條抗酸桿菌，則記錄下所發現的抗酸桿菌的條數以及觀察的的視野數，報告為抗酸桿菌可疑（±）。並且對標本進行複查，重新塗片。(3)鏡檢小於100個視野，發現有3~9條AFB，則記錄下100個視野內抗酸桿菌的數目，報告為抗酸桿菌陽性（1+）。(4)鏡檢小於10個視野發現有1~9條抗酸桿菌則報告為抗酸桿菌陽性（2+）。(5)若鏡檢每個視野都發現有1~9條抗酸桿菌則報告為抗酸桿菌陽陽性（3+）。(6)若鏡檢每個視野發現的抗酸桿菌數量都大於9條，則報告為抗酸桿菌陽性（4+）[5]。
1．4 統計方法
該研究採用spss16.0統計學軟體對所得的數據進行整理分析，計量資料均數±標準差（x±s）表示，採用t檢驗；計數資料採用χ2檢驗。檢驗標準α=0.05。
2 結果
2.1 痰標本檢測結果
2011年6月—2013年6月期間來該院檢查患者的痰標本共計1100份，不同的去痰時間段以及標本性質檢測，見表1。
2.2 兩種不同塗片方法對1100份痰液標鏡檢結果
直接塗片法對1100份痰液鏡檢陽性率為1.36%（15/1100）,而溶痰液塗片法進行鏡檢陽性率為3.09%（35/1100）,溶痰液塗片法的陽性率要明顯高於直接塗片法，兩種方法陽性檢測率差異有統計學意義（χ2=16.432，P < 0.05），見表2；即時痰、夜間痰、晨痰痰液標本利用直接塗片法其陽性檢測率分別為0.75%、1.30%、2.69%，而利用溶痰劑塗片法其鏡檢陽性檢測率分別為1.5%、2.60%、6.15%。溶痰液塗片法對不同性質的痰液標本鏡檢陽性率要明顯高於直接塗片法,差異有統計學意義（χ2=16.432，P<0.05），見表3。
3 討論
直接塗片法由上個世紀開始廣泛應用，到目前為止仍然是檢測結核病菌的主要方法之一。直接塗片法用於檢測抗酸桿菌得優點有報告時間短、成本低廉、技術相對簡單、特異性高[6]，但是直接塗片法所使用的檢體大多都沒有經過處理，而是直接做成抹片，進行染色工作，因此準確性較低，而未經過處理的痰液檢體在烘乾的過程中，陽性患者痰液中殘存的肺結核菌很容易被蒸發到空氣中，這樣就可能會造成周圍人員以及操作者的感染。而Baso溶痰劑能夠迅速地溶解痰液中的上皮細胞、粘液，而且也可以滅活非分支桿菌，這樣能夠減少鏡檢時的干擾，顯著地提高陽性檢測率，降低偽陽性的發生率[7-8]。
該研究結果表明，雖然規定唾液是不合格的標本，應該要求病人重新送檢黏液痰、膿性痰標本，但是通過檢測發現口水和唾液中存在著抗酸桿菌，所以在工作者對於少痰或者確實無痰的正常體檢人員和患者，為了臨床診斷的需要以及避免矛盾，也可以接受唾液痰，此外在必要時可以採取超聲霧化取痰[9-10]。直接塗片法共檢測出15份抗酸菌陽性標本，陽性率為1.36%，而溶痰劑塗片法共檢測出34份抗酸菌標本，陽性率為3.09%。溶痰液塗片法的陽性率要明顯高於直接塗片法，並且陽性等級也要高於直接塗片法。直接塗片法和溶痰液法對血痰、膿性痰、黏液痰、唾液痰痰液標本進行檢測其陽性率分別為：（3.06% vs 9.18%）、（2.63% vs 4.61%）、（1.18% vs 1.85%）、（0.78% vs 2.74%）；直接塗片法和溶痰液法對即時痰、夜間痰、晨痰痰液標本進行檢測其陽性率分別為（0.75% vs 1.5 %）、（1.30 vs 2.60%）、（2.69% vs 6.15%）。這表明對於不同性質的痰液標本以及不同時間段的痰液標本，溶痰液塗片法陽性檢查率均要優於直接塗片法。
綜上所述，在結核病的抗酸桿菌的檢測方法中，溶痰液塗片法陽性檢測率明顯優於直接塗片法，可以作為快速診斷結核病的方法和工具，值得在臨床上推廣應用。
參考文獻
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[10] 周建華.痰塗片法與痰培養法檢測抗酸桿菌結果比較[J].中國鄉村醫藥，2013,20(5):55.
（收稿日期：2014-10-15）
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