【摘要】目的 研究 黃連、黃芩對牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌、核梭桿菌厭氧菌的體外抑菌活性，為臨床篩選中藥 治療 厭氧菌感染提供依據。 方法 將黃連、黃芩製成煎劑，採用美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦的瓊脂稀釋法，測定此2種藥物對3種細菌的最小抑菌濃度（MIC）。結果 黃連對中間普氏菌的MIC為1∶640；對牙齦紫質單胞菌、核梭桿菌的MIC為1∶320。黃芩對牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌的MIC為1∶10；對核梭桿菌的MIC為1∶20。結論 黃連、黃芩對上述3種試驗菌株均具有不同程度的體外抑菌活性，其中黃連對中間普氏菌的抑菌活性最強，黃芩對3種細菌雖然也顯示活性，但均較黃連弱。
【關鍵詞】黃連；黃芩；瓊脂；微生物敏感試驗；細菌，厭氧
Inhibitory activity of coptidis rhizoma, radix scutellariae on three kinds of anaeroEies in vitro
GUO Xiujuan, ZHENG Jinxiu, LI Hong
Department of Immmunology, No.4 Hospital of HebEI Medical University, Hebei Province, Shijiazhuang 050011
【Abstract】 Objective To investigate the inhibitory activity in vitro of coptidis rhizoma, radix scutellariae on Porphyromonas gingivalis, Provotella intermedons, Fusobacterium nuleartum and provide evidence for drug susceptibility testing of the Chinese herbal. Methods The Chinese herbal was pureed, and adopted the methods of agar dilution recommended by NCCLS to investigate the MIC of Chinese herbal on the three different kinds of bacteria. Results The MIC of coptidis rhizoma on Probotella intermedons was 1∶640, and the MIC on Porphyromonas gingivalis and Fusobacterium nuleartum were 1∶320. the MIC of radix scutellariae on Porphyromonas gingivalis, Provotella intermedons and Fusobacterium nuleartum were 1∶10, 1∶10 and 1∶20 separately. Conclusion The coptidis rhizoma, radix scutellariae had different level inhibitory activity in vitro on the bacteria strain mentioned above. And the coptidis rhizoma had the most intensive inhibitory on Provotella intermedons,the radix scutellariae has lower lever inhibitory activity than the coptidis rhizoma.
【Key words】Coptidis rhizoma; Chinese herbal radix scutellariae; Microbe susceptibility testing; bacteria; Anaerobic
隨著抗生素的大量使用，各種細菌包括厭氧菌的耐藥率日趨升高。資料表明，厭氧菌可以通過產酶、細胞膜通透性改變、外排、線粒體突變、耐藥基因傳遞等機制導致耐藥率上升，而且長期使用抗生素治療還可能誘導菌群失調和真菌的二重感染［1～3］。因此，本研究選擇了3種致病性厭氧菌牙齦紫質單胞菌、 中間普氏菌、核梭桿菌作為研究對象，採用美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦的瓊脂稀釋法，檢測中藥黃連、黃芩對這3種厭氧菌的體外抑菌活性，以期為臨床 應用 中藥治療厭氧菌感染提供實驗依據。
1 材料與方法
1.1 材 料
1.1.1 菌株
牙齦紫質單胞菌（Pg ATCC33277）、中間普氏菌（Pi ATCC25611）、核梭桿菌（Fn ATCC10953）均由北京市口腔 醫院 研究所提供。
1.1.2 中藥煎劑的製備
稱取黃連100 g，加水1～2 L，浸泡30 min後煎煮，煮沸後文火煎30 min，100目篩過濾。藥渣加水0.5～1 L，按上述方法進行再次操作後，過濾藥液，合併2次濾液，用文火濃縮為100 mL，使藥液濃度為1∶1（每mL藥液含生藥1 g）。用孔徑為0.22 μm的Millex-Gp濾器過濾除菌，4℃保存備用。同樣製備黃芩煎劑備用。以上兩藥購自河北醫科大學第四醫院中藥房。
1.1.3 試劑
Wilkins-Chalgren厭氧肉湯、Wilkins-Chalgren厭氧瓊脂、M-H瓊脂均購於英國OXOID公司。
1.1.4 儀器
比濁儀（美國DADE BERING公司），2.5 L厭氧罐（法國BIOMERIEUX公司），改良2.5 L厭氧產氣袋、厭氧指示劑、Millex-GP 濾菌器（日本Nippon Millipore ltd 公司）。
1.2 方法
1.2.1 菌株復甦及菌懸液製備
用Wilkins Chalgren 厭氧肉湯將牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌、核梭桿菌分別復甦，轉種至含5%V/V脫纖維羊血的Wilkins Chalgren 厭氧瓊脂平板上（該瓊脂粉中已含有氯化血紅素和維生素K），置厭氧環境中（80%N2，10%H2，10%CO2）35℃培養48 h，經形態、生化實驗鑑定為純培養物後用鹽水製備菌懸液，採用麥氏比濁法用比濁儀調菌懸液濃度達0.5 Mcfarland單位［含 (1～2) ×108 cfu/mL］，稀釋10倍備用。
1.2.2 瓊脂稀釋平皿的製備
取9支無菌試管，第1管加入1 mL黃連煎劑，2～9管加入1 mL 0.9%氯化鈉注射液，第2管再加入1 mL黃連煎劑，2～9管依次做倍比稀釋。將Wilkins-Chalgren瓊脂融化，置於水浴中平衡置50℃，按5%V/V比例加入脫纖維羊血，無菌操作吸取9 mL加置上述試管中，混勻傾注7 mL於平皿中。使瓊脂平皿黃連倍比稀釋度分別為1∶10、1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280、1∶2560，黃連濃度分別為100、50、25、12.50、6.25、3.13、1.56、0.78、0.39 mg/mL。同樣方法製備含黃芩的Wilkins-Chalgren瓊脂平皿。同時設不加中藥平皿為生長對照。
1.2.3 接種瓊脂稀釋平皿
用微量多點接種儀將製備好的牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌、核梭桿菌懸液分別點種1 μL於含不同濃度的黃連、黃芩的Wilkins-Chalgren瓊脂平皿上，置厭氧環境中，35℃培養48 h。
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