作者：李軍，竇科峰，趙青川，張洪濤，孔亞林，張福琴
【關鍵詞】原位肝移植
Establishment and improvement of rat orthotopic liver transplantation model with twocuff technique
【Abstract】 AIM: To improve the model of rat orthotopic liver transplantation and study the rates of success and longterm survival of the model. METHODS: On the basis of twocuff technique of Kamada, weve improved the techniques of separating, perfusing donor liver, the shearing and anastomosis of the superior and inferior caval vEins, the bile duct anastomosis, and so on. RESULTS: Operation had been performed 80 times with improved techniques and 92 times with conventional techniques. In contrast to conventional techniques, the improved techniques reduced the average time of donor operation and that of recipients to （24.3±3.2） min and (56.4±5.0) min（P<0.05）, elevated 48hour survival rate to 91.3%(73/80) and 1week survival rate to 87.5%(70/80)（P<0.05）. CONCLUSION: The improved techniques have raised the quality of donor liver and the success rate of the model.
【Keywords】 orthotopic liver transplantation; rat; model; improvement
【摘要】 目的: 改進兩套袖法大鼠原位肝移植模型， 研究 其手術成功率和遠期存活率. 方法 ：在Kamada兩套袖法基礎上,著重對供肝分離、灌注、肝上下腔靜脈切取，肝上下腔靜脈吻合，膽管吻合等手術方法作了進一步改進. 結果：改進方法共施行手術80次，與以往92次傳統手術法相比，供體手術時間（24.3±3.2）min和受體手術時間(56.4±5.0) min縮短（P<0.05），48 h存活率91.3% (73/80)和1 wk存活率87.5% (70/80)明顯提高（P<0.05）. 結論：改進的兩套袖法大鼠原位肝移植能明顯提高供肝的質量和受體手術成功率.
【關鍵詞】 原位肝移植；大鼠；模型；改進
0引言
大鼠原位肝移植是肝移植基礎研究的理想模型. 1973年，Lee等首次提出 「縫合法」大鼠原位肝移植［1］，此後，二套袖法(門脈、肝下下腔靜脈套袖吻合)、三套袖法(門脈、肝上下腔靜脈、肝下下腔靜脈均用套袖吻合) 及各種改良方法相繼出現［2-4］. 目前 ，二套袖法因成功率高已成為主要建模方法,但由於操作複雜， 影響 成功的因素多，故而難以推廣 應用 . 我們在傳統二套袖法基礎上進行改進, 成功建立了模型，降低了其製作難度，並提高了手術成功率.
1材料和方法
1.1材料雄性SD大鼠160隻,體質量200～250 g(購於第四軍醫大學實驗動物中心) , 受體體質量略重於供體（30 g左右），供、受體術前12 h禁食. 自製聚乙烯袖套:門脈袖套內徑1.8～2.0 mm,肝下下腔靜脈袖套內徑2.5～3.0 mm，膽管插管由硬膜外麻醉管製成，長0.4～0.5 mm. 雙極電凝器, 上海手術器械廠顯微外科手術器械包,乙醚麻醉筒，清潔手術.
1.2方法
1.2.1供體手術術前肌注阿托品0.03～0.05 mg，乙醚吸入麻醉，仰臥位,背部墊1 mL注射器作為腰橋. 取上腹部大十字切口，上至劍突，下至恥骨聯合，左右至腋後線. 進腹後, 暫不分離肝臟. 將腸管推向左下腹，暴露第一肝門及肝下下腔靜脈. 將尾狀葉推向左側，顯露右腎上腺，電灼切斷腎上腺靜脈. 分離右腎靜脈與肝下下腔靜脈. 結紮切斷右腎蒂，下腔靜脈游離完成. 游離膽管，儘量保留周圍組織，以防術後缺血壞死，在肝管匯合部遠端0.5 cm處剪開膽總管前壁,向近端插入支撐管,絲線結紮並保留. 插管前可用顯微鑷輕擴膽管，注意插入不要過深，以防堵塞盤狀乳頭葉膽管. 於下腔靜脈遠端注射2 mL肝素生理鹽水(25 U/mL)全身肝素化. 結紮切斷幽門靜脈，在門脈左側結紮肝固有動脈. 阻斷腸系膜上靜脈遠端，近端插入自製灌注管，立即用0～4℃肝素生理鹽水(5 U/mL)經輸液器勻速灌注. 剪開下腔靜脈遠端及肝上下腔靜脈胸段，使灌注液順利流出，同時向肝臟淋撒0～4℃生理鹽水降溫. 待肝臟變成土黃色後，剪斷肝下下腔靜脈、門靜脈，殘端儘量留長. 由下向上剪斷肝周韌帶，直至肝上下腔靜脈. 靠肝臟縫扎膈肌靜脈，略微分離肝上下腔靜脈後方組織，輕輕下牽肝臟，「一剪法」剪下肝上下腔靜脈，使其不帶隔肌組織.
1.2.2供肝修整供肝置於0～4℃生理鹽水中. 選取口徑合適套管，管柄統一置於血管前壁用以定位，將門靜脈牽入套管中，血管夾固定套管和血管，夾柄部固定. 外翻血管套在袖套上，絲線固定. 操作中注意避免血管扭轉. 同法處理肝下下腔靜脈. 肝上下腔靜脈無需修整,在其左右側角各縫吊80縫線,備吻合時用. 修整完畢後置4℃冰箱中保存.
1.2.3受體手術術前處置同供體. 取上腹部弧形切口，電灼切開肌肉. 剪斷肝周韌帶, 縫扎左膈靜脈，電灼離斷肝食管間血管及右腎上腺靜脈,適當分離肝下下腔靜脈至右腎靜脈匯入處. 於膽管匯合處上方切斷肝管，將左肝管於匯入處斜行剪除. 切斷肝動脈. 分離門脈至幽門靜脈處. 阻斷肝下下腔、門靜脈. 於門脈左右分支處穿刺,推平衡鹽2 mL驅血,至肝臟變為土黃色. 用自製血管夾連帶部分膈肌阻斷肝上下腔靜脈. 下牽肝臟,剪斷肝上下腔,保留足夠長度殘端. 剪斷門脈時保留左右分支，肝下下腔殘端保留部分肝組織. 取出肝臟，撤除麻醉，原位放入供肝,肝前、後放濕沙布. 將肝上下腔兩側吊線與受體靜脈左右兩端內進外出縫合打結，然後從左至右連續外翻縫合肝上下腔後壁,至右側角打結，同理縫合靜脈前壁. 顯露第一肝門，於受體門脈左右分支縫牽引線，向頭側牽開，於分支匯合處剪開其前壁，松血管夾排除少量血液，供肝門脈套入受體門脈中,絲線固定,套入同時沖洗吻合口. 開放門脈,肝上下腔靜脈,結束無肝期. 溫生理鹽水腹腔復溫. 此時肝臟迅速充血，腸管淤血減輕,數分鐘即可見膽汁流出. 若有局部灌注不良區可通過按摩手段改善. 同法完成肝下下腔吻合. 用1∶5～7的碳酸氫鈉和乳酸林格液2 mL在肝下下腔和左腎靜脈分叉平面下方注入補液，可以稀釋血液並對抗無肝期造成的酸中毒，還可以增加血容量［5］. 沖洗膽管支撐管及受體膽管，供肝膽管結紮線向下牽引固定後，支撐管套入受體膽管中，供受體膽管結紮線拉攏打結. 大網膜覆蓋膽管吻合處. 沖洗腹腔,全層連續縫合腹壁切口. 術後光照6 h保暖，定期皮下補充平衡鹽. 24 h後可隨意進食.
【關鍵詞】原位肝移植
Establishment and improvement of rat orthotopic liver transplantation model with twocuff technique
【Abstract】 AIM: To improve the model of rat orthotopic liver transplantation and study the rates of success and longterm survival of the model. METHODS: On the basis of twocuff technique of Kamada, weve improved the techniques of separating, perfusing donor liver, the shearing and anastomosis of the superior and inferior caval vEins, the bile duct anastomosis, and so on. RESULTS: Operation had been performed 80 times with improved techniques and 92 times with conventional techniques. In contrast to conventional techniques, the improved techniques reduced the average time of donor operation and that of recipients to （24.3±3.2） min and (56.4±5.0) min（P<0.05）, elevated 48hour survival rate to 91.3%(73/80) and 1week survival rate to 87.5%(70/80)（P<0.05）. CONCLUSION: The improved techniques have raised the quality of donor liver and the success rate of the model.
【Keywords】 orthotopic liver transplantation; rat; model; improvement
【摘要】 目的: 改進兩套袖法大鼠原位肝移植模型， 研究 其手術成功率和遠期存活率. 方法 ：在Kamada兩套袖法基礎上,著重對供肝分離、灌注、肝上下腔靜脈切取，肝上下腔靜脈吻合，膽管吻合等手術方法作了進一步改進. 結果：改進方法共施行手術80次，與以往92次傳統手術法相比，供體手術時間（24.3±3.2）min和受體手術時間(56.4±5.0) min縮短（P<0.05），48 h存活率91.3% (73/80)和1 wk存活率87.5% (70/80)明顯提高（P<0.05）. 結論：改進的兩套袖法大鼠原位肝移植能明顯提高供肝的質量和受體手術成功率.
【關鍵詞】 原位肝移植；大鼠；模型；改進
0引言
大鼠原位肝移植是肝移植基礎研究的理想模型. 1973年，Lee等首次提出 「縫合法」大鼠原位肝移植［1］，此後，二套袖法(門脈、肝下下腔靜脈套袖吻合)、三套袖法(門脈、肝上下腔靜脈、肝下下腔靜脈均用套袖吻合) 及各種改良方法相繼出現［2-4］. 目前 ，二套袖法因成功率高已成為主要建模方法,但由於操作複雜， 影響 成功的因素多，故而難以推廣 應用 . 我們在傳統二套袖法基礎上進行改進, 成功建立了模型，降低了其製作難度，並提高了手術成功率.
1材料和方法
1.1材料雄性SD大鼠160隻,體質量200～250 g(購於第四軍醫大學實驗動物中心) , 受體體質量略重於供體（30 g左右），供、受體術前12 h禁食. 自製聚乙烯袖套:門脈袖套內徑1.8～2.0 mm,肝下下腔靜脈袖套內徑2.5～3.0 mm，膽管插管由硬膜外麻醉管製成，長0.4～0.5 mm. 雙極電凝器, 上海手術器械廠顯微外科手術器械包,乙醚麻醉筒，清潔手術.
1.2方法
1.2.1供體手術術前肌注阿托品0.03～0.05 mg，乙醚吸入麻醉，仰臥位,背部墊1 mL注射器作為腰橋. 取上腹部大十字切口，上至劍突，下至恥骨聯合，左右至腋後線. 進腹後, 暫不分離肝臟. 將腸管推向左下腹，暴露第一肝門及肝下下腔靜脈. 將尾狀葉推向左側，顯露右腎上腺，電灼切斷腎上腺靜脈. 分離右腎靜脈與肝下下腔靜脈. 結紮切斷右腎蒂，下腔靜脈游離完成. 游離膽管，儘量保留周圍組織，以防術後缺血壞死，在肝管匯合部遠端0.5 cm處剪開膽總管前壁,向近端插入支撐管,絲線結紮並保留. 插管前可用顯微鑷輕擴膽管，注意插入不要過深，以防堵塞盤狀乳頭葉膽管. 於下腔靜脈遠端注射2 mL肝素生理鹽水(25 U/mL)全身肝素化. 結紮切斷幽門靜脈，在門脈左側結紮肝固有動脈. 阻斷腸系膜上靜脈遠端，近端插入自製灌注管，立即用0～4℃肝素生理鹽水(5 U/mL)經輸液器勻速灌注. 剪開下腔靜脈遠端及肝上下腔靜脈胸段，使灌注液順利流出，同時向肝臟淋撒0～4℃生理鹽水降溫. 待肝臟變成土黃色後，剪斷肝下下腔靜脈、門靜脈，殘端儘量留長. 由下向上剪斷肝周韌帶，直至肝上下腔靜脈. 靠肝臟縫扎膈肌靜脈，略微分離肝上下腔靜脈後方組織，輕輕下牽肝臟，「一剪法」剪下肝上下腔靜脈，使其不帶隔肌組織.
1.2.2供肝修整供肝置於0～4℃生理鹽水中. 選取口徑合適套管，管柄統一置於血管前壁用以定位，將門靜脈牽入套管中，血管夾固定套管和血管，夾柄部固定. 外翻血管套在袖套上，絲線固定. 操作中注意避免血管扭轉. 同法處理肝下下腔靜脈. 肝上下腔靜脈無需修整,在其左右側角各縫吊80縫線,備吻合時用. 修整完畢後置4℃冰箱中保存.
1.2.3受體手術術前處置同供體. 取上腹部弧形切口，電灼切開肌肉. 剪斷肝周韌帶, 縫扎左膈靜脈，電灼離斷肝食管間血管及右腎上腺靜脈,適當分離肝下下腔靜脈至右腎靜脈匯入處. 於膽管匯合處上方切斷肝管，將左肝管於匯入處斜行剪除. 切斷肝動脈. 分離門脈至幽門靜脈處. 阻斷肝下下腔、門靜脈. 於門脈左右分支處穿刺,推平衡鹽2 mL驅血,至肝臟變為土黃色. 用自製血管夾連帶部分膈肌阻斷肝上下腔靜脈. 下牽肝臟,剪斷肝上下腔,保留足夠長度殘端. 剪斷門脈時保留左右分支，肝下下腔殘端保留部分肝組織. 取出肝臟，撤除麻醉，原位放入供肝,肝前、後放濕沙布. 將肝上下腔兩側吊線與受體靜脈左右兩端內進外出縫合打結，然後從左至右連續外翻縫合肝上下腔後壁,至右側角打結，同理縫合靜脈前壁. 顯露第一肝門，於受體門脈左右分支縫牽引線，向頭側牽開，於分支匯合處剪開其前壁，松血管夾排除少量血液，供肝門脈套入受體門脈中,絲線固定,套入同時沖洗吻合口. 開放門脈,肝上下腔靜脈,結束無肝期. 溫生理鹽水腹腔復溫. 此時肝臟迅速充血，腸管淤血減輕,數分鐘即可見膽汁流出. 若有局部灌注不良區可通過按摩手段改善. 同法完成肝下下腔吻合. 用1∶5～7的碳酸氫鈉和乳酸林格液2 mL在肝下下腔和左腎靜脈分叉平面下方注入補液，可以稀釋血液並對抗無肝期造成的酸中毒，還可以增加血容量［5］. 沖洗膽管支撐管及受體膽管，供肝膽管結紮線向下牽引固定後，支撐管套入受體膽管中，供受體膽管結紮線拉攏打結. 大網膜覆蓋膽管吻合處. 沖洗腹腔,全層連續縫合腹壁切口. 術後光照6 h保暖，定期皮下補充平衡鹽. 24 h後可隨意進食.