作者：曹淵 李創舉 夏之寧 徐彥芹 張運民
【摘要】 目的優選金銀花中綠原酸的最佳提取方法和提取工藝。方法以金銀花中綠原酸的含量為指標，考察了水蒸氣蒸餾法、超聲波提取法和醇提法提取金銀花中綠原酸優劣，確定超聲法為最佳提取方法。通過正交實驗，以溶劑濃度、預浸時間、超聲時間和pH值4個因素對超聲法的提取工藝進行優選。結果得到最佳的提取工藝條件為：乙醇濃度為60%，pH值1，預浸12 h，超聲提取2次，45 min/次；此條件下綠原酸提取率可達5.62%。影響程度為：pH值>預浸時間>超聲時間>溶劑濃度。結論工藝簡單，提取條件溫和，提取率高，可為提取綠原酸的大規模產業化所應用。
【關鍵詞】 金銀花； 綠原酸； 超聲； 提取； 正交實驗
Abstract：ObjectiveTo optimize the best methods and extraction process of extraction of chlorogenic acid from Honeysuckle.MethodsThe chlorogenic acid content and extraction rate in Honeysuckle as the standards, different extraction methods, such as steam distillation, returning ethanol, ultrasound, were inspected, and the ultrasound method was determined as the best method. The effects of solvent concentration, presoaking time, ultrasound time, pH value on the ultrasound extraction process were also optimized. ResultsThe best extraction conditions were as follows: concentration of ethanol at 60%, pH value 5.0, presoaking time for 12h, extraction 2 times and 45mins each time. Extraction yield of chlorogenic acid from Honeysuckle by ultrasound was 5.62%; the effect degree: pH value> presoaking time> ultrasound time> solvent concentration. ConclusionThis method is simple, the extracting condition is gentle, the rate of extraction is high, and this process is apt to industrial production of extraction of chlorogenic acid from Honeysuckle.
Key words：Honeysuckle; Chlorogenic acid; Ultrasonic; Extract; Orthogonal test
金銀花為忍冬科植物忍冬的乾燥花蕾,具有清熱解毒、抗菌消炎、保肝利膽的功能，是常用的中藥材之一［1］。它所含的化學成分有綠原酸、異綠原酸、黃酮化合物、芳樟醇和雙花醇等［2］,其中綠原酸被認為是抗菌解毒、消炎利膽的主要有效成分，在醫藥、衛生等領域具有很大的應用價值，所以從植物中提取分離綠原酸以及綠原酸的純化具有重要的意義。
金銀花提取工藝有水提法［3］、微波法［4］、酶解法［5］、乙醇回流法［6］等。本實驗考察了水提法、超聲提取法和醇提法提取金銀花中綠原酸的優劣，並在此基礎上進行了超聲提取的正交實驗，以確定最佳提取條件，為進一步應用於 工業 大生產奠定基礎。
1 材料與儀器
As 3120A型超聲清洗儀（天津奧特賽恩斯儀器有限公司），旋轉蒸發儀(上海亞榮生化機械公司)，T6新世紀紫外可見分光光度儀(北京普析通用)，FA1004N型 電子 天平（上海菁海儀器有限公司）,PHS-3C型精密pH計(上海雷磁儀器廠)，HZ-D(Ⅲ)循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）；金銀花（重慶秀山縣野生），綠原酸標準品（成都慢思生物科技有限公司），無水乙醇，95%乙醇，異戊醇，醋酸乙酯，均為市售分析純，實驗用水為自製蒸餾水。
2 方法
2.1 標準曲線的建立
2.1.1 波長的選擇稱取綠原酸標準品0.006 8 g，用95%乙醇定容至250 ml容量瓶，作為母液，然後移取1.00 ml定容至10 ml容量瓶，用紫外分光光度計對其溶液進行光譜掃描，可知綠原酸在波長332 nm處有最大吸收。
2.1.2 標準曲線的繪製分別移取母液1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml於10 ml容量瓶中，補加蒸餾水至刻度線,以蒸餾水為空白，在332 nm處分別測出吸光度。以綠原酸濃度（mg/L）為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪製標準曲線，得回歸方程為:A=0.051 7C+0.006 2，R2=0.999 3。
2.2 水蒸氣蒸餾法分別稱取3份金銀花6.000 g，用剪刀剪碎後置於250 ml圓底燒瓶，加蒸餾水100 ml，回流1 h，過濾，濾渣加蒸餾水100 ml，回流1 h過濾，合併濾液。濾液用旋轉蒸發儀濃縮至約40 ml。濃縮液用異戊醇萃取3次，40 ml/次，合併萃取液。萃取液定容至250 ml，從中吸取1.5 ml再定容至100 ml容量瓶中，在332 nm處測其吸光度， 計算 綠原酸的平均提取率。
2.3 乙醇回流法分別稱取3份金銀花6.000 g，用剪刀剪碎，加入到250 ml圓底燒瓶中，加入100 ml 95%的乙醇，加熱回流1 h，過濾，濾渣加入與之對應濃度乙醇100 ml，回流1 h，過濾，合併濾液。濾液用旋轉蒸發儀濃縮至約40 ml，用異戊醇萃取3次，40 ml/次,合併萃取液。萃取液定容至250 ml的容量瓶中，從中吸取1.00 ml溶液再定容至100 ml容量瓶中，在332 nm處測其吸光度，計算綠原酸的平均提取率。
2.4 超聲法分別稱取3份金銀花6.000 g，用剪刀剪碎後置於250 ml圓底燒瓶中，加95%乙醇100 ml，預浸12 h，超聲30 min，過濾，對濾渣重複上述操作，合併濾液。濾液用旋轉蒸發儀濃縮至約40 ml，濃縮液用異戊醇萃取3次，40 ml/次，合併萃取液。萃取液定容至250 ml，從中吸取1 ml定容至100 ml容量瓶中，在332 nm處測其吸光度，計算綠原酸的平均提取率。
2.5 超聲法提取正交實驗根據綠原酸的結構和性質，初步判定提取過程中影響因素有：超聲時間、溶液pH值、溶劑濃度及預浸時間。以綠原酸得率為指標，採用正交實驗對條件進行優化。選用正交表L9(34)。因素水平設計見表1。
表1 超聲法正交實驗因素和水平（略）
分別稱取6.000 g金銀花9份，用剪刀剪碎置於9個250 ml具塞容量瓶中，按正交實驗設計調整超聲時間、溶液pH值、溶劑濃度及預浸時間，後處理同「2.4」項。
【摘要】 目的優選金銀花中綠原酸的最佳提取方法和提取工藝。方法以金銀花中綠原酸的含量為指標，考察了水蒸氣蒸餾法、超聲波提取法和醇提法提取金銀花中綠原酸優劣，確定超聲法為最佳提取方法。通過正交實驗，以溶劑濃度、預浸時間、超聲時間和pH值4個因素對超聲法的提取工藝進行優選。結果得到最佳的提取工藝條件為：乙醇濃度為60%，pH值1，預浸12 h，超聲提取2次，45 min/次；此條件下綠原酸提取率可達5.62%。影響程度為：pH值>預浸時間>超聲時間>溶劑濃度。結論工藝簡單，提取條件溫和，提取率高，可為提取綠原酸的大規模產業化所應用。
【關鍵詞】 金銀花； 綠原酸； 超聲； 提取； 正交實驗
Abstract：ObjectiveTo optimize the best methods and extraction process of extraction of chlorogenic acid from Honeysuckle.MethodsThe chlorogenic acid content and extraction rate in Honeysuckle as the standards, different extraction methods, such as steam distillation, returning ethanol, ultrasound, were inspected, and the ultrasound method was determined as the best method. The effects of solvent concentration, presoaking time, ultrasound time, pH value on the ultrasound extraction process were also optimized. ResultsThe best extraction conditions were as follows: concentration of ethanol at 60%, pH value 5.0, presoaking time for 12h, extraction 2 times and 45mins each time. Extraction yield of chlorogenic acid from Honeysuckle by ultrasound was 5.62%; the effect degree: pH value> presoaking time> ultrasound time> solvent concentration. ConclusionThis method is simple, the extracting condition is gentle, the rate of extraction is high, and this process is apt to industrial production of extraction of chlorogenic acid from Honeysuckle.
Key words：Honeysuckle; Chlorogenic acid; Ultrasonic; Extract; Orthogonal test
金銀花為忍冬科植物忍冬的乾燥花蕾,具有清熱解毒、抗菌消炎、保肝利膽的功能，是常用的中藥材之一［1］。它所含的化學成分有綠原酸、異綠原酸、黃酮化合物、芳樟醇和雙花醇等［2］,其中綠原酸被認為是抗菌解毒、消炎利膽的主要有效成分，在醫藥、衛生等領域具有很大的應用價值，所以從植物中提取分離綠原酸以及綠原酸的純化具有重要的意義。
金銀花提取工藝有水提法［3］、微波法［4］、酶解法［5］、乙醇回流法［6］等。本實驗考察了水提法、超聲提取法和醇提法提取金銀花中綠原酸的優劣，並在此基礎上進行了超聲提取的正交實驗，以確定最佳提取條件，為進一步應用於 工業 大生產奠定基礎。
1 材料與儀器
As 3120A型超聲清洗儀（天津奧特賽恩斯儀器有限公司），旋轉蒸發儀(上海亞榮生化機械公司)，T6新世紀紫外可見分光光度儀(北京普析通用)，FA1004N型 電子 天平（上海菁海儀器有限公司）,PHS-3C型精密pH計(上海雷磁儀器廠)，HZ-D(Ⅲ)循環水式真空泵（鞏義市予華儀器有限責任公司）；金銀花（重慶秀山縣野生），綠原酸標準品（成都慢思生物科技有限公司），無水乙醇，95%乙醇，異戊醇，醋酸乙酯，均為市售分析純，實驗用水為自製蒸餾水。
2 方法
2.1 標準曲線的建立
2.1.1 波長的選擇稱取綠原酸標準品0.006 8 g，用95%乙醇定容至250 ml容量瓶，作為母液，然後移取1.00 ml定容至10 ml容量瓶，用紫外分光光度計對其溶液進行光譜掃描，可知綠原酸在波長332 nm處有最大吸收。
2.1.2 標準曲線的繪製分別移取母液1.00，2.00，3.00，4.00，5.00，6.00 ml於10 ml容量瓶中，補加蒸餾水至刻度線,以蒸餾水為空白，在332 nm處分別測出吸光度。以綠原酸濃度（mg/L）為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪製標準曲線，得回歸方程為:A=0.051 7C+0.006 2，R2=0.999 3。
2.2 水蒸氣蒸餾法分別稱取3份金銀花6.000 g，用剪刀剪碎後置於250 ml圓底燒瓶，加蒸餾水100 ml，回流1 h，過濾，濾渣加蒸餾水100 ml，回流1 h過濾，合併濾液。濾液用旋轉蒸發儀濃縮至約40 ml。濃縮液用異戊醇萃取3次，40 ml/次，合併萃取液。萃取液定容至250 ml，從中吸取1.5 ml再定容至100 ml容量瓶中，在332 nm處測其吸光度， 計算 綠原酸的平均提取率。
2.3 乙醇回流法分別稱取3份金銀花6.000 g，用剪刀剪碎，加入到250 ml圓底燒瓶中，加入100 ml 95%的乙醇，加熱回流1 h，過濾，濾渣加入與之對應濃度乙醇100 ml，回流1 h，過濾，合併濾液。濾液用旋轉蒸發儀濃縮至約40 ml，用異戊醇萃取3次，40 ml/次,合併萃取液。萃取液定容至250 ml的容量瓶中，從中吸取1.00 ml溶液再定容至100 ml容量瓶中，在332 nm處測其吸光度，計算綠原酸的平均提取率。
2.4 超聲法分別稱取3份金銀花6.000 g，用剪刀剪碎後置於250 ml圓底燒瓶中，加95%乙醇100 ml，預浸12 h，超聲30 min，過濾，對濾渣重複上述操作，合併濾液。濾液用旋轉蒸發儀濃縮至約40 ml，濃縮液用異戊醇萃取3次，40 ml/次，合併萃取液。萃取液定容至250 ml，從中吸取1 ml定容至100 ml容量瓶中，在332 nm處測其吸光度，計算綠原酸的平均提取率。
2.5 超聲法提取正交實驗根據綠原酸的結構和性質，初步判定提取過程中影響因素有：超聲時間、溶液pH值、溶劑濃度及預浸時間。以綠原酸得率為指標，採用正交實驗對條件進行優化。選用正交表L9(34)。因素水平設計見表1。
表1 超聲法正交實驗因素和水平（略）
分別稱取6.000 g金銀花9份，用剪刀剪碎置於9個250 ml具塞容量瓶中，按正交實驗設計調整超聲時間、溶液pH值、溶劑濃度及預浸時間，後處理同「2.4」項。