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苗木培養材料的採集與消毒

2023年10月03日

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苗木組織培養中各種用於接種培養的材料稱為外植體。包括苗木體的各種器官、組織、細胞和原生質體等。組織培養所用的材料非常廣泛,可採取根、莖、葉、花、芽和種子的子葉,有時也利用花粉粒和花葯,其中根尖不易滅菌,一般很少採用。
對於木本花卉來說,闊葉樹可在一二年生的
枝條上採集,針葉樹種多採種子內的子葉或胚
軸.草本苗木多採集莖尖。
在快速繁殖中,最常用的培養材料是莖尖,通常切塊在0.5001左右,如果為培養無病毒苗而採用的培養材料通常僅取莖尖的分生組織部分,其長度在0.111皿以下。
培養材料的滅菌
取來的材料雖經選擇,外部總還有不少雜菌,因此,接種前應進行表面滅菌。
①先將材料用流水沖洗乾淨,最後一遍用蒸餾水沖洗,再用無菌紗布或吸水紙將材料上的水分吸干,並用消毒刀片切成小塊。
②在無菌環境中將材料放人70《酒精中浸泡30〜60So
③再將材料移人漂白粉的飽和液或0.01%升汞水中消莓5〜10min.
④取出後用無菌水沖洗三四次。
將已滅菡的材料,用無菌刀、剪、鑷等,在無
菌的環境下,剝去芽的鱗片、嫩枝的外皮和種皮胚乳等,葉片則不需剝皮。然後切成0.2〜
50巾厚的小片,這就是外植體。在操作中嚴禁用手觸動材料。
4.4.2接種
接種是指把經過表面滅菌後的苗木材料切碎或分離出器官、組織、細胞,轉放到無菌培養基上的全部操作過程。整個過程均須無菌操作。
①接種前先把接種室紫外燈打開,照射滅菌20〜30!^⑴或提前0.5〜1d用髙錳酸鉀和甲醛混合液熏蒸。接種台要提前開啟。
②操作人員進人接種室前需用肥皂水洗手滅菌,換上經過消毒滅菌的白色工作服和拖鞋,戴上工作帽和口罩。
③進人接種室後用70《的酒精棉球擦拭雙手、超凈工作檯和需放上工作.台的所有器具,防止交叉污染。‘
④點燃酒精燈,將接種鈎、剪刀、鑷子放人不鏽鋼盤或瓷盤內燒灼,冷卻後備用。接種鈎、剪刀、鑷子等不使用時浸泡在95‘冗的酒精中,用時在火焰上滅菌,待冷卻後使用。每次使用前均需進行用具滅菌。
⑤將外植體放入經燒灼滅菌的不鏽鋼盤或瓷盤內處理。如外植體為莖段的,將莖段上的葉柄和莖的上下端剪掉一小節;培養脫毒苗的,在雙筒解剖鏡下剝離切取大小0.2〜0.‘3mm時莖尖分生組織。
⑥燒灼瓶口和塞子,將培養瓶傾斜拿穩,打開塞子,用鑷子將接種材料送人瓶內,用接種鈎將材料壓人培養基中,燒灼瓶口和塞子,並上塞。此過程中要注意避免細菌污染。-
4.4.3培養
初代培養
將從苗木體上分離下來的部分進行第一次培養,稱初代培養,也稱誘導培養。培養基由於苗木種類的不同而不同,通常是?^5基本培養基加人適量的苗木生長調節劑及其他成分。首先在251下進行暗培養,待長出愈傷組織後轉入光培養。此階段主要誘導芽體解除休眠,恢復生長。
增殖培養
也稱繼代培養。外植體的增殖是組培的關鍵階段,在新梢等形成後為了擴大繁殖係數,需要繼代培養。把材料分株或切段轉人增殖培養基中,增殖培養基一般在分化培養基上加以改良,以利於增殖率的提高。增殖一個月左右後,可視情況進行再增殖。為了防止變異或突變,通常只繼代培養10〜12次。根據需要,一部分進行生根培養,一部分仍繼代培養,陸續供用。
繼代培養的接種過程與初代培養有兩點不
同,一是不需要對接種材料進行滅菌處理;二是
在空間較大的培養瓶中接種,接種更方便。
生根培養
.繼代培養形成的不定芽和側芽等一般沒有根,必須轉到生根培養基上進行生根培養。培養基通常為1/2朋5培養基加人適量的苗木生長調節劑。切取增殖培養瓶中的無根苗,接種到生根培養基上進行誘根培養,一個月後即可獲得健壯根系。有些易生根的苗木在繼代培養中通常會

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