●李瑞午 李翠紅 汪智民
(中國中醫研究院針灸所,100700;1北京針灸骨傷學院解剖教研室)
摘要對"足三里"穴區不同層次感覺和運動神經元的節段性分布進行了研究。結果證明"足三里"穴區皮內、皮下、肌層的感覺運動神經的節段性分布略有不同。皮內注射其感覺神經元分布偏於頭側,相對數量較多,節段分布窄,較為集中,以中小細胞標記為主;皮下注射感覺神經元分布較少;肌層注射感覺神經元分布偏於尾側數量較多,標記細胞節段分布寬,較為分散,以大中型細胞為主。因此,認為肌層的經穴神經分布可能與經脈臟腑相關的關係更為密切。
主題詞穴,足三里/神經支配神經節,感覺運動神經元
不少學者[1,2]對穴位傳入傳出神經元的節段性分布進行了不少的研究,大部分的研究將穴位定位在肌層,而臨床上常用的針灸穴位有深淺不等,因此研究不同層次下穴位的感覺和運動神經元的節段性分布對指導臨床針灸的應用是十分必要的。本研究以"足三里"穴位為例,對皮內、皮下、肌層3種不同深度下穴位的傳入、傳出神經元的節段性分布進行了比較和研究,現彙報如下。
1材料和方法
1.1實驗動物
中國中醫研究院動物室提供的大白鼠,雌雄不拘,體重250～300 g 22隻。
動物隨機分為兩組,甲組:右側注射,深度為皮下;左側注射,深度為肌層共12隻。乙組:左側注射,深度為肌層;右側注射,深度為皮內共10隻。因此肌層注射為22隻側,皮內為10隻側,皮下為12隻側。
藥物:辣根過氧化物酶(HRP)Rz=6.0為上海化學試劑公司產品,四甲基聯苯氨(TMB)、硝普鈉均為美國Sigma公司產品,其他多聚甲醛、戊二醛、硫酸二氫鈉、硫酸氫二鈉、過氧化氫、鉻明礬、明膠等均為北京化學試劑公司產品。
1.2注射方法
取5%HRP的生理鹽水溶液50 μl,應用微量注射器,根據比較解剖學的測量方法,於大白鼠脛骨外側,脛骨粗隆下"足三里"穴,分別垂直進針(肌層)、45度進針(皮下)和10度進針(皮內)在皮內打成皮丘。注射的範圍約0.5 cm左右。注射後動物存活72 h。
灌流和取材:動物用1%戊巴比妥鈉過量麻醉後,經主動脈插管灌流,順序注入4%枸緣酸鈉200 ml,0.9%氯化鈉溶液200 ml,1%多聚甲醛+1.25%戊二醛的磷酸鹽緩衝液和10%的0.1 M(pH 7.4)的磷酸鹽緩衝液,固定液灌流時間不少於20 min,灌流後取L1～S3的脊髓和背根節,分別放入20%的蔗糖0.1 M(pH7.4)磷酸鹽緩衝液,貯存過夜。
冰凍厚40 μm,切片裱於塗有鉻明礬明膠的玻片上,切片經蒸餾水沖洗後,經四甲基聯苯胺(TMB)顯色[3],中性紅復染,上行脫水後二甲苯透明,樹脂膠封固,光學顯微鏡下觀察。
2結果
標記細胞的確定:標記神經元的胞漿內充滿黑藍色的小圓形顆粒,其胞核區無標記物存在形成中空的圓形缺損,未被標記的細胞胞漿內有中性紅復染後可顯粉紅色顆粒。
"足三里"穴肌層注射HRP後,在標記的脊髓背根神經節細胞主要見於L3～S2的節段,細胞以大中型細胞為多,標記細胞高峰見於L4和L5占標記細胞總數的75%以上。其中L3占6.2%,L4占30.4%,L5占45.1%,S1占14.2%,S2占4.1%。其在脊髓前角也見有大量標記細胞,主要見於L5和S1,其標記細胞在前角細胞位置主要見於前角後側。
"足三里"穴皮下注射HRP後,其標記細胞的數量明顯少,在背根節中標記細胞的數量僅為肌肉注射細胞數量的4～5分之一。細胞仍是大中型細胞為主,其標記細胞的高峰以L4為主,範圍為L3～S1。L3占10%,L4占50%,L5占25%,S1占15%。其在脊髓前角中細胞數量也遠不如肌層注射多,其數量約為肌層3～4分之一。其標記細胞與肌層的相比,細胞位置偏於前角的前內側。
"足三里"穴區皮內注射HRP後,其在脊髓背根節中的標記細胞數量比肌層注射相對要少;而比皮下注射的明顯要多。其大、中、小型標記細胞均可見,但以小型標記細胞為主。標記細胞的範圍為L2～L5,與肌層注射相比有明顯前移現象,而且高峰區集中在L3節段。其中L2占2.1%,L3占93.4%,L4占3.4%,L5占1.1%。在脊髓前角的標記神經元數量明顯少於肌肉與皮下,不足皮下的二分之一,僅為肌肉的7～8分之一。細胞位置與皮下位置大致相同。具體內容詳見表1。
3討論
本研究結果證明"足三里"穴區肌肉層、皮下層、皮內層和各層間的神經分布略有不同。根據其在背根節標記細胞的數量,分析其感覺神經末梢的分布多少的順序是肌層最多、皮內次之、皮下最少,其節段分布肌層最寬(L3～S2)、皮內最窄(L2～L5)、皮下居中(L3～S1)。在背根節標記細胞大小,肌層以大中細胞為主,皮內以大中小細胞均有,但小細胞為多見。其標記細胞出現的最高峰節段肌肉偏於尾側(L5),而皮內偏於頭側(L3),皮內的標記細胞最為集中,皮下的標記細胞數量最少,肌層的標記細胞較為分散。此結果說明針刺穴位時,刺入皮內受試者,疼痛感覺明顯定位準確可能與中小型細胞較多有關;而進入皮下後,疼痛不明顯;針刺深入肌層其感覺以酸麻重脹為主,定位不明確,這與穴位肌層中感覺神經的分布有一定關係。其感覺器可能以肌梭為主,其後根節中的大中型標記細胞似參與這部分信息的傳遞功能。
由於皮內層標記細胞相對集中,針刺時定位明確,因此可能淺刺以局部穴位治療局部疾病為主;而肌層其標記細胞分散,定位相對不準確,因此,深刺可能與治療有關臟腑疾病有關,因其與相應臟腑的感覺神經末梢可能在此有交匯的分布。
標記的運動神經元主要分布於相應節段的前角細胞柱,其比感覺神經元的分布節段相對較窄。肌層注射的標記細胞較多,而皮內與皮下均較少。但其標記細胞在前角細胞柱的位置有所不同。其肌層標記細胞主要見於前角的後外側,而在皮下和皮內注射後的標記細胞主要分布在前角細胞柱的前內側。這與傳統的解剖學知識有所不同,四肢肌肉的運動神經元應分布於前角柱的後外側,而前角細胞柱的前內側細胞主要支配中軸肌。皮下和皮內的標記細胞出現在前角細胞柱的前內側是否有何特殊的機能,有待進一步的實驗研究。
4小結
(1)"足三里"穴區皮內、皮下、肌層的感覺運動神經的節段性分布略有不同。
(2)皮內注射其感覺神經元分布偏於頭側,相對數量較多,節段分布窄,較為集中,以中小細胞標記為主。
(3)皮下注射感覺神經元分布較少。
(4)肌層注射感覺神經元分布偏於尾側數量較多,標記細胞節段分布寬,較為分散,以大中型細胞為主。
提示:淺刺以局部穴治療局部疾病為主,深刺到肌層可能與治療臟腑疾病有關。因此,肌層的經穴神經分布可能與經脈臟腑相關的關係更為密切。
5參考文獻
1陶之理,等.足三里穴區感覺神經元的節段性分布.針刺研究,1983;(2):136
2張家駒,等.家兔足三里穴與盲腸傳入神經元節段性分布-HRP研究.針刺研究,1992;(3):123
3Mesulam MM.Tracing Neural Connection with Horseradish Peroxidase,IBRO Handbook Series:Methods in the Neurosciences.New York,John Wiley and Sons,1982;(2):36
(收稿日期:19990224,齊淑蘭發稿)
(中國中醫研究院針灸所,100700;1北京針灸骨傷學院解剖教研室)
摘要對"足三里"穴區不同層次感覺和運動神經元的節段性分布進行了研究。結果證明"足三里"穴區皮內、皮下、肌層的感覺運動神經的節段性分布略有不同。皮內注射其感覺神經元分布偏於頭側,相對數量較多,節段分布窄,較為集中,以中小細胞標記為主;皮下注射感覺神經元分布較少;肌層注射感覺神經元分布偏於尾側數量較多,標記細胞節段分布寬,較為分散,以大中型細胞為主。因此,認為肌層的經穴神經分布可能與經脈臟腑相關的關係更為密切。
主題詞穴,足三里/神經支配神經節,感覺運動神經元
不少學者[1,2]對穴位傳入傳出神經元的節段性分布進行了不少的研究,大部分的研究將穴位定位在肌層,而臨床上常用的針灸穴位有深淺不等,因此研究不同層次下穴位的感覺和運動神經元的節段性分布對指導臨床針灸的應用是十分必要的。本研究以"足三里"穴位為例,對皮內、皮下、肌層3種不同深度下穴位的傳入、傳出神經元的節段性分布進行了比較和研究,現彙報如下。
1材料和方法
1.1實驗動物
中國中醫研究院動物室提供的大白鼠,雌雄不拘,體重250～300 g 22隻。
動物隨機分為兩組,甲組:右側注射,深度為皮下;左側注射,深度為肌層共12隻。乙組:左側注射,深度為肌層;右側注射,深度為皮內共10隻。因此肌層注射為22隻側,皮內為10隻側,皮下為12隻側。
藥物:辣根過氧化物酶(HRP)Rz=6.0為上海化學試劑公司產品,四甲基聯苯氨(TMB)、硝普鈉均為美國Sigma公司產品,其他多聚甲醛、戊二醛、硫酸二氫鈉、硫酸氫二鈉、過氧化氫、鉻明礬、明膠等均為北京化學試劑公司產品。
1.2注射方法
取5%HRP的生理鹽水溶液50 μl,應用微量注射器,根據比較解剖學的測量方法,於大白鼠脛骨外側,脛骨粗隆下"足三里"穴,分別垂直進針(肌層)、45度進針(皮下)和10度進針(皮內)在皮內打成皮丘。注射的範圍約0.5 cm左右。注射後動物存活72 h。
灌流和取材:動物用1%戊巴比妥鈉過量麻醉後,經主動脈插管灌流,順序注入4%枸緣酸鈉200 ml,0.9%氯化鈉溶液200 ml,1%多聚甲醛+1.25%戊二醛的磷酸鹽緩衝液和10%的0.1 M(pH 7.4)的磷酸鹽緩衝液,固定液灌流時間不少於20 min,灌流後取L1～S3的脊髓和背根節,分別放入20%的蔗糖0.1 M(pH7.4)磷酸鹽緩衝液,貯存過夜。
冰凍厚40 μm,切片裱於塗有鉻明礬明膠的玻片上,切片經蒸餾水沖洗後,經四甲基聯苯胺(TMB)顯色[3],中性紅復染,上行脫水後二甲苯透明,樹脂膠封固,光學顯微鏡下觀察。
2結果
標記細胞的確定:標記神經元的胞漿內充滿黑藍色的小圓形顆粒,其胞核區無標記物存在形成中空的圓形缺損,未被標記的細胞胞漿內有中性紅復染後可顯粉紅色顆粒。
"足三里"穴肌層注射HRP後,在標記的脊髓背根神經節細胞主要見於L3～S2的節段,細胞以大中型細胞為多,標記細胞高峰見於L4和L5占標記細胞總數的75%以上。其中L3占6.2%,L4占30.4%,L5占45.1%,S1占14.2%,S2占4.1%。其在脊髓前角也見有大量標記細胞,主要見於L5和S1,其標記細胞在前角細胞位置主要見於前角後側。
"足三里"穴皮下注射HRP後,其標記細胞的數量明顯少,在背根節中標記細胞的數量僅為肌肉注射細胞數量的4～5分之一。細胞仍是大中型細胞為主,其標記細胞的高峰以L4為主,範圍為L3～S1。L3占10%,L4占50%,L5占25%,S1占15%。其在脊髓前角中細胞數量也遠不如肌層注射多,其數量約為肌層3～4分之一。其標記細胞與肌層的相比,細胞位置偏於前角的前內側。
"足三里"穴區皮內注射HRP後,其在脊髓背根節中的標記細胞數量比肌層注射相對要少;而比皮下注射的明顯要多。其大、中、小型標記細胞均可見,但以小型標記細胞為主。標記細胞的範圍為L2～L5,與肌層注射相比有明顯前移現象,而且高峰區集中在L3節段。其中L2占2.1%,L3占93.4%,L4占3.4%,L5占1.1%。在脊髓前角的標記神經元數量明顯少於肌肉與皮下,不足皮下的二分之一,僅為肌肉的7～8分之一。細胞位置與皮下位置大致相同。具體內容詳見表1。
3討論
本研究結果證明"足三里"穴區肌肉層、皮下層、皮內層和各層間的神經分布略有不同。根據其在背根節標記細胞的數量,分析其感覺神經末梢的分布多少的順序是肌層最多、皮內次之、皮下最少,其節段分布肌層最寬(L3～S2)、皮內最窄(L2～L5)、皮下居中(L3～S1)。在背根節標記細胞大小,肌層以大中細胞為主,皮內以大中小細胞均有,但小細胞為多見。其標記細胞出現的最高峰節段肌肉偏於尾側(L5),而皮內偏於頭側(L3),皮內的標記細胞最為集中,皮下的標記細胞數量最少,肌層的標記細胞較為分散。此結果說明針刺穴位時,刺入皮內受試者,疼痛感覺明顯定位準確可能與中小型細胞較多有關;而進入皮下後,疼痛不明顯;針刺深入肌層其感覺以酸麻重脹為主,定位不明確,這與穴位肌層中感覺神經的分布有一定關係。其感覺器可能以肌梭為主,其後根節中的大中型標記細胞似參與這部分信息的傳遞功能。
由於皮內層標記細胞相對集中,針刺時定位明確,因此可能淺刺以局部穴位治療局部疾病為主;而肌層其標記細胞分散,定位相對不準確,因此,深刺可能與治療有關臟腑疾病有關,因其與相應臟腑的感覺神經末梢可能在此有交匯的分布。
標記的運動神經元主要分布於相應節段的前角細胞柱,其比感覺神經元的分布節段相對較窄。肌層注射的標記細胞較多,而皮內與皮下均較少。但其標記細胞在前角細胞柱的位置有所不同。其肌層標記細胞主要見於前角的後外側,而在皮下和皮內注射後的標記細胞主要分布在前角細胞柱的前內側。這與傳統的解剖學知識有所不同,四肢肌肉的運動神經元應分布於前角柱的後外側,而前角細胞柱的前內側細胞主要支配中軸肌。皮下和皮內的標記細胞出現在前角細胞柱的前內側是否有何特殊的機能,有待進一步的實驗研究。
4小結
(1)"足三里"穴區皮內、皮下、肌層的感覺運動神經的節段性分布略有不同。
(2)皮內注射其感覺神經元分布偏於頭側,相對數量較多,節段分布窄,較為集中,以中小細胞標記為主。
(3)皮下注射感覺神經元分布較少。
(4)肌層注射感覺神經元分布偏於尾側數量較多,標記細胞節段分布寬,較為分散,以大中型細胞為主。
提示:淺刺以局部穴治療局部疾病為主,深刺到肌層可能與治療臟腑疾病有關。因此,肌層的經穴神經分布可能與經脈臟腑相關的關係更為密切。
5參考文獻
1陶之理,等.足三里穴區感覺神經元的節段性分布.針刺研究,1983;(2):136
2張家駒,等.家兔足三里穴與盲腸傳入神經元節段性分布-HRP研究.針刺研究,1992;(3):123
3Mesulam MM.Tracing Neural Connection with Horseradish Peroxidase,IBRO Handbook Series:Methods in the Neurosciences.New York,John Wiley and Sons,1982;(2):36
(收稿日期:19990224,齊淑蘭發稿)
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