作者：周欣， 陳華國，趙超，龔小見，李明
【摘要】
目的建立蓬莪術藥材揮發性成分的氣相色譜－質譜聯用分析（GC-MS）指紋圖譜，為蓬莪術藥材的質量控制提供 參考 。方法採用水蒸氣蒸餾法提取蓬莪術揮髮油，用GC-MS聯用技術對其進行指紋圖譜測定，並且利用「中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟體」對不同樣品之間的相似度進行 計算 。結果初步建立了蓬莪術揮髮油的GC-MS指紋圖譜，標定了20個共有峰，各批次藥材均有上述特徵，但特徵峰的相對含量存在一定差異。結論該方法有良好的重現性和精密度，再加上GC-MS具有多成分同時定性的優勢，所建立的蓬莪術揮髮油的GC-MS指紋圖譜為其質量控制提供了 科學 依據。
【關鍵詞】 蓬莪術 揮髮油 氣相色譜-質譜聯用 指紋圖譜
Abstract：ObjectiveTo establish a method of fingerprint analysis on volatile oil of Curcuma phaeocaulis Valeton by GC-MS. MethodsThe essential oil of Curcuma phaeocaulis Valeton growing in Shuangliu city of Sichuan province was extracted by steam distillation and the chromatographic fingerprint was characterized by GC-MS. The GC-MS analysis was carried out in a Hewlett Packard model 6890 gas chromatograph coupled with a Hewlett Packard model 5973 mass detector. A Hewlett Packard HP-5 (5% phenyl methyl siloxane) fused silica capillary column (30 m×0.25 mm I. D., 0.25μm film thickness) was used for the separation. ResultsWe established Mutual fingerprint of the essential oil of Curcuma phaeocaulis Valeton by using the similarity calculation software of Chinese herbal fingerprint designed by Research Center of Modernization of Chinese Herbal Medicines of Central South University RSD of precision and reproducibility and stability of this GC-MS method was in the range of 5%. Compared with Mutual fingerprint of the essential oil of Curcuma phaeocaulis Valeton, the coefficients of 10 samples of the essential oil of Curcuma phaeocaulis Valeton were all above 90%, without abnormal sample.ConclusionThe method is reliable, accurate and can be used for quality control of essential oil of Curcuma phaeocaulis Valeton.
Key words：Curcuma phaeocaulis Valeton ; Essential oils; GC-MS; Fingerprint
莪術是姜科植物蓬莪術Curcuma phaeocaulis Valeton、廣西莪術Curcuma kwangsinensis S.G.Lee et C.F. Liang和溫莪術Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的乾燥根莖。中醫理論認為莪術辛、苦、溫，歸肝、脾經，具行氣破血、消積止痛的功效［1］。莪術揮髮油中的β-欖香烯對腫瘤細胞生長有直接抑制作用［2］。莪術油能抑制腫瘤細胞異常增殖［3］。
莪術油的質量直接關係到其製劑的質量，由於中藥材的藥效不是來自任何單一的活性成分，任何單一活性成分都不能確切反映中醫用藥所體現的整體療效，所以採用任何單一活性成分或指標成分都難以準確評價中藥的真偽和優劣。中藥產業 現代 化的瓶頸是質量不可控、安全不可靠［4］。為加強中藥生產的質量管理和臨床用藥的安全，國家藥品監督管理局在中藥質量標準中引入指紋圖譜技術要求。色譜技術測定指紋圖譜具有綜合、宏觀、「模糊」的非線性特點。本研究按照《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求》（暫行）和《中藥注射劑色譜指紋圖譜試驗研究操作規程指南》（試行）的規定，首次採用GC-MS對蓬莪術揮發性成分建立指紋圖譜。由於不同種、不同產地的莪術藥材揮發性成分及含量有較大差異［5］，所建立的中藥指紋圖譜必須固定藥材的種屬和產地，因而選定四川省種植的蓬莪術Curcuma phaeocaulis Valeton（道地藥材［6］），採用水蒸氣蒸餾法提取蓬莪術揮髮油，採用GC-MS聯用技術測定其指紋圖譜，並且利用「中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟體」對不同樣品之間的相似度進行計算，為蓬莪術藥材的綜合質量控制提供參考。
1 器材
HP6890/HP5973 GC/MS 聯用儀（美國惠普公司）。色譜柱為HP-5MS 5% Phenyl Methyl Siloxane（30 m×0.25 mm×0.25 μm）彈性石英毛細管柱，醋酸乙酯(分析純，上海化學試劑有限公司)。
柱溫60℃，保持1 min，以10℃·min-1升溫至100℃，再以4℃·min-1升溫至200℃後，以20℃·min-1升溫至280℃，保持2 min；汽化室溫度 250℃；載氣為高純He（純度為99.999%）；柱前壓 52.6 kPa，載氣流量1.0 ml·min-1；進樣量 1 μl；分流比40∶1。離子源為Ei源；離子源溫度230℃；四極杆溫度150℃； 電子 能量70 eV；發射電流34.6 μA；接口溫度280℃；倍增器電壓：1 388V；溶劑延遲4 min；質量範圍10～550 amu。
採集10批次四川省種植的蓬莪術（樣品由四川成都仙森生物科技有限公司提供），經本實驗室的嚴志堅博士鑑定為Curcuma phaeocaulis Valeton。
2 方法與結果
2.1 揮髮油的提取
取蓬莪術乾燥根莖粉碎成粗粉，過0.64 mm篩，稱量80 g，加入1 000 ml燒瓶中，加8倍水量，用揮髮油提取器提取6 h(提取條件經正交實驗優化)，獲得具有特殊氣味的油狀物，用無水硫酸鈉除去水分放置於冰箱（-18℃）中備用。
2.2 精密度取同一批次樣品，在所建立的測定條件下，連續進樣5次，實驗結果得出TIC圖中各色譜峰相對保留時間的RSD在0.29%～1.22%之間,各共有峰的相對峰面積的RSD＜5%，其指紋圖譜的相關係數在0.981～0.993之間，符合指紋圖譜研究的技術要求。
2.3 重複性取同一批蓬莪術藥材5份，按樣品製備方法製備，並在所建立的測定條件下測定，結果表明，TIC圖中各共有峰相對保留時間的RSD在0.41%～1.84%之間，各共有峰的相對峰面積的RSD＜5%，其指紋圖譜的相關係數在0.962～0.981之間，符合指紋圖譜研究的技術要求。
【摘要】
目的建立蓬莪術藥材揮發性成分的氣相色譜－質譜聯用分析（GC-MS）指紋圖譜，為蓬莪術藥材的質量控制提供 參考 。方法採用水蒸氣蒸餾法提取蓬莪術揮髮油，用GC-MS聯用技術對其進行指紋圖譜測定，並且利用「中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟體」對不同樣品之間的相似度進行 計算 。結果初步建立了蓬莪術揮髮油的GC-MS指紋圖譜，標定了20個共有峰，各批次藥材均有上述特徵，但特徵峰的相對含量存在一定差異。結論該方法有良好的重現性和精密度，再加上GC-MS具有多成分同時定性的優勢，所建立的蓬莪術揮髮油的GC-MS指紋圖譜為其質量控制提供了 科學 依據。
【關鍵詞】 蓬莪術 揮髮油 氣相色譜-質譜聯用 指紋圖譜
Abstract：ObjectiveTo establish a method of fingerprint analysis on volatile oil of Curcuma phaeocaulis Valeton by GC-MS. MethodsThe essential oil of Curcuma phaeocaulis Valeton growing in Shuangliu city of Sichuan province was extracted by steam distillation and the chromatographic fingerprint was characterized by GC-MS. The GC-MS analysis was carried out in a Hewlett Packard model 6890 gas chromatograph coupled with a Hewlett Packard model 5973 mass detector. A Hewlett Packard HP-5 (5% phenyl methyl siloxane) fused silica capillary column (30 m×0.25 mm I. D., 0.25μm film thickness) was used for the separation. ResultsWe established Mutual fingerprint of the essential oil of Curcuma phaeocaulis Valeton by using the similarity calculation software of Chinese herbal fingerprint designed by Research Center of Modernization of Chinese Herbal Medicines of Central South University RSD of precision and reproducibility and stability of this GC-MS method was in the range of 5%. Compared with Mutual fingerprint of the essential oil of Curcuma phaeocaulis Valeton, the coefficients of 10 samples of the essential oil of Curcuma phaeocaulis Valeton were all above 90%, without abnormal sample.ConclusionThe method is reliable, accurate and can be used for quality control of essential oil of Curcuma phaeocaulis Valeton.
Key words：Curcuma phaeocaulis Valeton ; Essential oils; GC-MS; Fingerprint
莪術是姜科植物蓬莪術Curcuma phaeocaulis Valeton、廣西莪術Curcuma kwangsinensis S.G.Lee et C.F. Liang和溫莪術Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling的乾燥根莖。中醫理論認為莪術辛、苦、溫，歸肝、脾經，具行氣破血、消積止痛的功效［1］。莪術揮髮油中的β-欖香烯對腫瘤細胞生長有直接抑制作用［2］。莪術油能抑制腫瘤細胞異常增殖［3］。
莪術油的質量直接關係到其製劑的質量，由於中藥材的藥效不是來自任何單一的活性成分，任何單一活性成分都不能確切反映中醫用藥所體現的整體療效，所以採用任何單一活性成分或指標成分都難以準確評價中藥的真偽和優劣。中藥產業 現代 化的瓶頸是質量不可控、安全不可靠［4］。為加強中藥生產的質量管理和臨床用藥的安全，國家藥品監督管理局在中藥質量標準中引入指紋圖譜技術要求。色譜技術測定指紋圖譜具有綜合、宏觀、「模糊」的非線性特點。本研究按照《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術要求》（暫行）和《中藥注射劑色譜指紋圖譜試驗研究操作規程指南》（試行）的規定，首次採用GC-MS對蓬莪術揮發性成分建立指紋圖譜。由於不同種、不同產地的莪術藥材揮發性成分及含量有較大差異［5］，所建立的中藥指紋圖譜必須固定藥材的種屬和產地，因而選定四川省種植的蓬莪術Curcuma phaeocaulis Valeton（道地藥材［6］），採用水蒸氣蒸餾法提取蓬莪術揮髮油，採用GC-MS聯用技術測定其指紋圖譜，並且利用「中藥色譜指紋圖譜相似度評價軟體」對不同樣品之間的相似度進行計算，為蓬莪術藥材的綜合質量控制提供參考。
1 器材
HP6890/HP5973 GC/MS 聯用儀（美國惠普公司）。色譜柱為HP-5MS 5% Phenyl Methyl Siloxane（30 m×0.25 mm×0.25 μm）彈性石英毛細管柱，醋酸乙酯(分析純，上海化學試劑有限公司)。
柱溫60℃，保持1 min，以10℃·min-1升溫至100℃，再以4℃·min-1升溫至200℃後，以20℃·min-1升溫至280℃，保持2 min；汽化室溫度 250℃；載氣為高純He（純度為99.999%）；柱前壓 52.6 kPa，載氣流量1.0 ml·min-1；進樣量 1 μl；分流比40∶1。離子源為Ei源；離子源溫度230℃；四極杆溫度150℃； 電子 能量70 eV；發射電流34.6 μA；接口溫度280℃；倍增器電壓：1 388V；溶劑延遲4 min；質量範圍10～550 amu。
採集10批次四川省種植的蓬莪術（樣品由四川成都仙森生物科技有限公司提供），經本實驗室的嚴志堅博士鑑定為Curcuma phaeocaulis Valeton。
2 方法與結果
2.1 揮髮油的提取
取蓬莪術乾燥根莖粉碎成粗粉，過0.64 mm篩，稱量80 g，加入1 000 ml燒瓶中，加8倍水量，用揮髮油提取器提取6 h(提取條件經正交實驗優化)，獲得具有特殊氣味的油狀物，用無水硫酸鈉除去水分放置於冰箱（-18℃）中備用。
2.2 精密度取同一批次樣品，在所建立的測定條件下，連續進樣5次，實驗結果得出TIC圖中各色譜峰相對保留時間的RSD在0.29%～1.22%之間,各共有峰的相對峰面積的RSD＜5%，其指紋圖譜的相關係數在0.981～0.993之間，符合指紋圖譜研究的技術要求。
2.3 重複性取同一批蓬莪術藥材5份，按樣品製備方法製備，並在所建立的測定條件下測定，結果表明，TIC圖中各共有峰相對保留時間的RSD在0.41%～1.84%之間，各共有峰的相對峰面積的RSD＜5%，其指紋圖譜的相關係數在0.962～0.981之間，符合指紋圖譜研究的技術要求。
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