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副溶血性弧菌食物中毒診斷技術

2023年08月07日

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  (一)檢驗方法
  1.樣品採集
  以無菌方法採取具代表性的樣品,置滅菌的容器內。一般採集患者糞便、嘔吐物和中毒的可疑原因食品。常見可疑的食品有魚、蝦、蟹、貝等海產品及其他有關的食品。若上述食品均為煮熟品,也可檢驗它們的包裝物、烹調用具等。
  副溶血弧菌不宜在低溫環境中生存,故採集到的樣品應儘快送往實驗室,不宜冷凍保存運送,以免影響檢驗結果。
  2.分離培養
  副溶血弧菌營養要求不高,普通培養基、蛋白腖水中均可生長。在含鹽3.5%的培養基上生長良好,0.5%鹽時可生長,12%以上及無鹽的培養基中不能生長。發育溫度為30-37~C,以37~C最佳。生長的pH範圍是7.0-9.5,最適pH為7.7~8.0,需氧性強,厭氧生長很緩慢。多數菌株於肉湯、蛋白腖水等培養基中呈渾濁表面形成菌膜。R型菌發生沉澱。厭氧培養48h以上,才見生長。固體培養基上菌落常呈圓形隆起,不透明,表面光滑、濕潤,多數菌株繼代後,呈不正圓。粗糙型菌落,灰白半透明或不透明,在EMB瓊脂上不生長。某些菌株在麥康凱培養基上不生長;生長者,其菌落為圓形、平坦、半透明或渾濁略帶紅色。從腹瀉病例初次分離到的菌落多較典型一般不形成色素。食品中分離到的菌株,多為R型。膽酸鹽稍有阻止該菌擴散的作用,血平板上可見溶血環。在氯化鈉蔗糖平板上菌落呈綠色。S.S瓊脂上菌落中等大,無色透明、扁平、有動性,不易被接種環挑起。 該菌對乙酸,90%以上菌株對0/129抑制弧2,4-二氨基-6,7-二異丙基喋啶)敏感。該菌的溶血作用是因其具有耐熱性溶血素,這種溶血素是相對分子質量約為42000的酸性蛋白質,對心臟有毒性,是一種即時型致死毒。
  (二)動物試驗
  經上述試驗符合副溶血性弧菌的菌株接種於3.5%NaCl蛋白腖水中,經16-18h培養後,小鼠腹腔注射0.3ml,觀察2-3天。小鼠症狀為豎毛,不活潑,食欲不振,腹部貼飼養罐底,呼吸困難,步態蹣跚有時呈痙攣性跳動、四肢抽搐及尾部痙攣性振動,多於24-48h內死亡,將死亡小鼠作剖檢與分離培養。
  (三)患者血清凝集試驗
  從患者分離的S型菌株,接種於3.5%食鹽的瓊脂斜面,37C培養24h,以無菌生理鹽水洗下稀釋成每毫升含菌10億個的菌液沸水煮1h,加入0.5%苯酚即成O抗原。將其與患者血清作試管凝集試驗(1:10)~(1:640),於37~C過夜,觀察。凝集價在(1:80)一(1:160)為陽性,1:40為可疑。通常發病10天後凝集價開始下降。
  (四) KP溶血試驗
  副溶血性弧菌臨床分離株絕大部分都能產生耐熱直接溶血毒素(thermostable direct hemolysin,TDH),並能在鮮血平板上產生一種特殊的溶血現象,叫做神奈川現象(kanawaga phenomenen,KP)。該試驗需經過前增菌、選擇性增菌、選擇性培養後,挑取可疑菌落接種到鮮血平板上,置於37℃孵箱中過夜,如菌苔周圍出現透明溶血環,即為KP陽性,據此診斷樣本中含有Vp。該試驗是檢測副溶血性弧菌最基本的方法,能把絕大部分副溶血性弧菌檢測出來,但操作煩瑣、所需時間長(約4天),而且存在部分TDH-株,易漏檢,給人們健康帶來危害。
  

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