【摘要】 對共振光散射技術在藥物與生物大分子分析測定中的應用狀況及其進展進行了綜述。重點介紹了該方法在生物體液中藥物的分析和中藥成分的分析應用前景。為體內大分子藥物及其他藥物成分的檢測方法研究提供了新途徑。
【關鍵詞】 共振光散射技術; 藥物分析
Abstract:The application and the development of the resonance light scattering (RLS) method used in drug determination and the biomacromolecule determination was reviewed. The application of RLS in pharmaceutical quantification in biological fluids,and the application of RLS in quantification of Chinese medicine were reviewed. This method might be a novel way for the determination macromolecular drugs and other medicinal ingredients in vivo.
Key words:resonance light scattering; pharmaceutical quantification
共振光散射(resonance light scattering，RLS)是利用普通螢光分光光度法對散射光進行測量的一種散射光分析技術[1]。該技術由於其簡單、快速、靈敏的分析特點，吸引了生命 科學 、分析化學、環境科學、材料科學等領域的分析工作者對其理論和應用進行了深入的研究，促進了分析學科內部各個分支之間的聯繫，尤其是在生化領域已經取得一定的研究成果[2]。
光散射現象廣泛存在於光與粒子相互作用的過程中，當介質中粒子的直徑(d)與入射光波長(λ0)存在d≤0.05 λ0時，產生的是以瑞利(RaylEigh)散射為主的分子散射光[3]。根據RLS理論可以得到散射光強度與散射粒子的濃度c成正比的關係，即IRLS=Kcb。據此可以用於大分子物質溶液的分析測定[1]。
RLS分析法靈敏度高，操作簡單方便，可通過普通螢光分光光度計同步掃描得到完整的RLS特徵光譜和相應RLS峰。由於RLS法源於RaylEIgh散射光吸收光譜，它對分子結構大小和形狀(如球形、鏈形、無規則線團等)、電荷分布、鍵合性質等研究還能提供新的、更豐富的信息。近年來的研究證明，RLS法還可用於痕量金屬、表面活性劑以及納米材料[4,5]等方面的研究測定。該方法一般不需要對樣品進行複雜的化學預處理，避免了一系列煩瑣的操作程序，而直接將處理好的樣品溶液置於普通的螢光分光光度計中進行測定即可。
1 體液中生物大分子的測定
1.1 蛋白質
蛋白質的功能很多，與生命的起源和生物的進化、細胞結構、病毒、免疫、酶、激素、物質的遺傳等有密切的聯繫，它是生命現象的物質基礎。蛋白質定量測定是生物化學和生命學科中經常涉及的分析內容，在臨床醫學中也有重要應用。目前，蛋白質測定方法主要有Lowry法[6]，Bradford法[7]，Biuret法[8]，Bromoeersol Green法[9]與Bormophenol blue法[10]等。Pasetmack[1]將RLS技術用於測定微量蛋白質以來，RLS法分析技術以其方法簡單、快速、靈敏度高，在生物大分子分析測定研究中的報道日益增多，靈敏度可達納克級[11]。
黃承志等研究了陰離子表面活性劑羅丹明B(Rhodamine B，RhB)與十二烷基硫酸鈉(SDS)蛋白質體系的RLS光譜特徵。實驗發現，SDS與HSA(human serum albumin，HSA)結合後再與RhB作用，其散射光強度增強。且 RLS增強的程度與蛋白的濃度在一定範圍內呈線性關係。據此，建立了一種測定人血清中總蛋白質的新方法 [12]。胡之德等基於在pH2.11的酸性溶液中，聚乙二醇辛基苯基醚(OP)對亮麗春紅5R蛋白質體系的RLS信號有強烈的增敏現象，建立了OP蛋白質亮麗春紅5R三元體系測定人血清中蛋白質濃度的新方法。該體系對人血清白蛋白檢測的線性範圍在0.0～10.0 pg·mL-1之間，檢測限為5.0 ng·mL-1，檢測實際樣品的回收率在97.80%～109.62%之間，方法令人滿意[13]。王錫寧等利用RLS技術測定白蛋白、紅蛋白。研究了間苯二酚黃OP蛋白質體系RLS光譜特性，確定了在340.0 nm處，pH2.40，間苯二酚黃濃度為2.3×10-5 mol·L-1，OP的濃度為3.0×10-5 mol·L-1時為最佳反應條件，據此建立了一種靈敏度高的測定蛋白質的新方法[14]。薛蓓等研究了流動注射(FIA) RLS技術聯用在線測定人血清中蛋白質含量。以SDS為螢光探針，利用未曾報道過的RLS與FIA聯用檢測人血清樣品中蛋白質含量。與單純用RLS法測定比較，分析時間由40 min縮短至1 min，RLS信號的重現性得到了顯著改善，提高了實驗的靈敏度和重現性[15]。梁宏等在普通螢光分光光度計上選擇合適的激發光和發射光通帶寬度，利用RLS技術，研究了生理pH值(7.43±0.02)，25 ℃下，金(Ⅲ)與血清白蛋白的相互作用。首次觀測到金(Ⅲ)對血清白蛋白的RLS強度隨著金(Ⅲ)濃度增加而降低。結果表明，金(Ⅲ)與血清白蛋白的結合會破壞血清白蛋白分子聚集，使血清白蛋白中的二硫橋鍵斷裂，導致白蛋白分子趨於鬆散，散射截面積減小，表現為RLS強度降低[16]。
1.2 核酸
核酸是遺傳信息的載體和基因表達的物質基礎，在生物的生長、發育等活動中具有十分重要的作用。目前核酸分析測定的方法主要有分光光度法、螢光光度法、化學發光法、探針技術法、免疫分析法等，其中分光光度法[17]和螢光光度法[18]使用較多。紫外分光光度法操作簡單，但由於靈敏度低，測定的干擾因素多，使其在應用上受到了限制;螢光分析法具有選擇性好和靈敏度高，但螢光試劑價格昂貴，而且部分螢光試劑有致癌活性。針對上述情況，RLS法因操作簡便快速，靈敏度高，試劑無毒性等優勢，在核酸分析中也得到了廣泛的應用。
黃承志等利用溴化十六烷基三甲銨(cetyltrimethylammonsium bromide,CTMAB)是陽離子表面活性劑，核酸因帶有大量的磷酸根而帶負電荷的特性，證明了CTMAB和核酸通過靜電引力共吸附到液/液介面上形成兩性復合物，導致強烈增加的全內反射共振光散射(total internal reflected resonance light scattering，TIRRLS)信號，TIRRLS信號強度與核酸的濃度呈線性[19]。劉紹璞等研究了5種陽離子表面活性劑與核酸反應的RLS光譜[20]。陳展光等首次利用諾氟沙星做為RLS光譜探針，測定了葉綠體脫氧核糖核酸(ctDNA)。在pH5.87的BR(BrittonRobinson)緩衝溶液中，波長405.5 nm處出現最大RLS峰，ctDNA的線性響應範圍為0.02～2.30 μg·mL-1，檢測限為1.2 ng·mL-1。還合成了希夫鹼試劑三(2(鄰羥基苯基亞甲氨基)乙基)胺，並且研究了其與核酸在鹽酸介質中的反應。對希夫鹼劑三(2(鄰羥基苯基亞甲氨基)乙基)胺DNA體系的研究發現，在393.0nm處增加的RLS強度與核酸的濃度成線性關係(ctDNA，0.01～4.50 μg·mL-1;fsDNA，0.01～5.00 μg·mL-1)。ctDNA的檢測限是1.4 ng·mL-1，fsDNA的檢測限是2.1 ng·mL-1。結果與紫外可見分光光度法測得結果一致 [21]。林楓等研究在pH4.0介質中加入DNA和陽離子表面活性劑可使二甲酚橙的RLS增強，據此建立了以二甲酚橙為分子探針測定DNA的分析方法，適用於合成樣品中的DNA測定[22]。
2 在化學藥分析中的應用
黃承志等利用具有雙親性的RhBCTMAB全內反射共振光散射法測定肝素，肝素通過與RhB和CTMAB相互作用形成三元雙親性的復合物RhB肝素CTMAB，而被RhB和CTMAB協同吸附在水/四氯化碳(H2O/CCl4)介面上，引起強烈的TIRRLS增強信號用於肝素的測定[19]。陳展光等在氧氟沙星茜素紫3B體系中發現，pH5.09的BR緩衝溶液中，在439.5 nm處，0.10～2.50 μg·mL-1範圍內的氧氟沙星與增加的RLS強度成線性關係。與此同時，在pH6.90，405.0 nm處，0.05～3.00 μg·mL-1範圍內的氧氟沙星與RLS強度成線性關係，檢測限分別為0.013 μg·mL-1，0.021 μg·mL-1[21]。氧氟沙星茜素紫3B體系可用於人體的氧氟沙星血藥濃度測定。還建立了人血清中抗菌類四季銨化合物的RLS技術檢測方法[23]。陳展光等，建立的二溴羥基苯基螢光酮(DBHPF)曲通(Triton)X100鉬的共振光散射光譜新體系，分析測定了中藥、頭髮以及水中的微量鉬[21]。劉雲富等研究發現在硫酸介質中，砷鉬雜多酸與鹼性染料RhB締合導致RhB體系的RLS強度減弱，在一定濃度範圍內，砷(Ⅴ)的含量與體系減弱的RLS強度成線性關係，據此建立了RLS技術測定砷(Ⅴ)的新方法[24]。
3 在中藥分析中的應用
黃承志等，研究了螢光素(Flu)小檗鹼(BE)全內反射共振光散射法測定小檗鹼。採用TIRRLS技術通過Flu與BE在水/1,2,二氯乙烷(H2O/DCE)介面反應研究了BE在介面上的特性。Flu與BE形成雙親性的復合物，在H2O/DCE介面富集，並引起強烈增加的TIRRLS信號，最大吸收波長位於373.0 nm，所得信號強度在一定範圍內與BE濃度成正比關係，檢測限為1.3 ng·mL-1。本方法與藥典使用的HPLC方法對照靈敏度有所提高 [19]。張憶華等，在pH為10.0的Tris緩衝溶液中建立了綠原酸CTMABctDNA體系，實驗表明，440.0 nm處增強的RLS光強度(ΔIRLS)穩定，在0.002～0.10μg·mL-1的濃度範圍內，體系ΔIRLS與ctDNA的濃度具有良好的線性關係，檢測限為0.6 ng·mL-1。在厚朴酚CTMABctDNA體系中，選擇pH值為10.0的Tris緩衝溶液來控制反應體系的酸度，356.0 nm作為定量分析的波長。在0.02～1.00 μg·mL-1的濃度範圍內，ΔIRLS與ctDNA的濃度具有良好的線性關係。在最佳反應條件，320.0 nm處，pH10.0時，兒茶素CTMABctDNA體系在0.02～1.00 μg·mL-1的濃度範圍內，ΔIRLS與ctDNA的濃度成線性關係。類似的實驗還有山柰酚CTMABctDNA體系。此外，張憶華還研究了三價稀土離子與槲皮素、山柰酚所形成的絡合物的RLS光譜，研究了ctDNA對它的淬滅作用。建立了Tb3+/Eu3+槲皮素ctDNA體系以及Tb3+/Eu3+山柰酚ctDNA體系，結果表明，槲皮素與山柰酚通過配位作用與Tb3+/Eu3+結合，引起體系RLS光強度的增加，而當加入ctDNA後，體系的RLS光強度降低，原因是ctDNA結構中的磷酸骨架可以與Tb3+和Eu3+發生螯合作用，導致溶液中ctDNA和山柰酚與Tb3+/Eu3+的競爭配位。該方法取得了明顯的實驗成果[25]。
4 結語
由於RLS技術是建立在普通光譜法基礎上，分析結果雖然是物質的散射光譜信息，但物質形態特徵等卻不能被獲取。基於此問題，一種結合顯微成像技術的共振光散射成像技術被建立起來，對生物大分子的聚集形態進行了深入的研究和探討[26]，儀器的性能和工作條件對所獲信號影響大。由於RLS光譜在較大光譜通帶下獲得，因而不利於光譜精細結構的研究。雖然我們知道散射光強度與散射粒子濃度有關，但出發點是從同步光譜開始的，顯然其測定公式推導並未涉及RLS的散射本質。因此，用於分析化學的RLS技術原理與定量基礎尚未有定論。雖然RLS技術作為一種新興的分析測定技術存在一些不足，但隨著RLS技術理論和應用上研究的深入，使RLS技術不斷朝著痕量、高效、微觀和自動化方向 發展 ，極大地提高了RLS技術分析法的靈敏度，選擇性和特異性，應用領域不斷擴大。已報道的有關藥物的RLS分析方法主要涉及如下藥物：肝素[27]、地喹氯銨[23]、鹽酸小檗鹼[28]、多糖[29]、蘆丁[30]、氨基糖苷抗生素[31]、青黴素[32]等。除了一些常規的測定藥物的RLS方法之外，近幾年還發展了以下幾種方法[12]： RLS成像技術、FIARLS技術、雙波長比率RLS技術等。RLS技術以其更靈敏、更方便，不需要螢光物質的特定體系等優勢，必將更好地為藥物分析測試服務。
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【關鍵詞】 共振光散射技術; 藥物分析
Abstract:The application and the development of the resonance light scattering (RLS) method used in drug determination and the biomacromolecule determination was reviewed. The application of RLS in pharmaceutical quantification in biological fluids,and the application of RLS in quantification of Chinese medicine were reviewed. This method might be a novel way for the determination macromolecular drugs and other medicinal ingredients in vivo.
Key words:resonance light scattering; pharmaceutical quantification
共振光散射(resonance light scattering，RLS)是利用普通螢光分光光度法對散射光進行測量的一種散射光分析技術[1]。該技術由於其簡單、快速、靈敏的分析特點，吸引了生命 科學 、分析化學、環境科學、材料科學等領域的分析工作者對其理論和應用進行了深入的研究，促進了分析學科內部各個分支之間的聯繫，尤其是在生化領域已經取得一定的研究成果[2]。
光散射現象廣泛存在於光與粒子相互作用的過程中，當介質中粒子的直徑(d)與入射光波長(λ0)存在d≤0.05 λ0時，產生的是以瑞利(RaylEigh)散射為主的分子散射光[3]。根據RLS理論可以得到散射光強度與散射粒子的濃度c成正比的關係，即IRLS=Kcb。據此可以用於大分子物質溶液的分析測定[1]。
RLS分析法靈敏度高，操作簡單方便，可通過普通螢光分光光度計同步掃描得到完整的RLS特徵光譜和相應RLS峰。由於RLS法源於RaylEIgh散射光吸收光譜，它對分子結構大小和形狀(如球形、鏈形、無規則線團等)、電荷分布、鍵合性質等研究還能提供新的、更豐富的信息。近年來的研究證明，RLS法還可用於痕量金屬、表面活性劑以及納米材料[4,5]等方面的研究測定。該方法一般不需要對樣品進行複雜的化學預處理，避免了一系列煩瑣的操作程序，而直接將處理好的樣品溶液置於普通的螢光分光光度計中進行測定即可。
1 體液中生物大分子的測定
1.1 蛋白質
蛋白質的功能很多，與生命的起源和生物的進化、細胞結構、病毒、免疫、酶、激素、物質的遺傳等有密切的聯繫，它是生命現象的物質基礎。蛋白質定量測定是生物化學和生命學科中經常涉及的分析內容，在臨床醫學中也有重要應用。目前，蛋白質測定方法主要有Lowry法[6]，Bradford法[7]，Biuret法[8]，Bromoeersol Green法[9]與Bormophenol blue法[10]等。Pasetmack[1]將RLS技術用於測定微量蛋白質以來，RLS法分析技術以其方法簡單、快速、靈敏度高，在生物大分子分析測定研究中的報道日益增多，靈敏度可達納克級[11]。
黃承志等研究了陰離子表面活性劑羅丹明B(Rhodamine B，RhB)與十二烷基硫酸鈉(SDS)蛋白質體系的RLS光譜特徵。實驗發現，SDS與HSA(human serum albumin，HSA)結合後再與RhB作用，其散射光強度增強。且 RLS增強的程度與蛋白的濃度在一定範圍內呈線性關係。據此，建立了一種測定人血清中總蛋白質的新方法 [12]。胡之德等基於在pH2.11的酸性溶液中，聚乙二醇辛基苯基醚(OP)對亮麗春紅5R蛋白質體系的RLS信號有強烈的增敏現象，建立了OP蛋白質亮麗春紅5R三元體系測定人血清中蛋白質濃度的新方法。該體系對人血清白蛋白檢測的線性範圍在0.0～10.0 pg·mL-1之間，檢測限為5.0 ng·mL-1，檢測實際樣品的回收率在97.80%～109.62%之間，方法令人滿意[13]。王錫寧等利用RLS技術測定白蛋白、紅蛋白。研究了間苯二酚黃OP蛋白質體系RLS光譜特性，確定了在340.0 nm處，pH2.40，間苯二酚黃濃度為2.3×10-5 mol·L-1，OP的濃度為3.0×10-5 mol·L-1時為最佳反應條件，據此建立了一種靈敏度高的測定蛋白質的新方法[14]。薛蓓等研究了流動注射(FIA) RLS技術聯用在線測定人血清中蛋白質含量。以SDS為螢光探針，利用未曾報道過的RLS與FIA聯用檢測人血清樣品中蛋白質含量。與單純用RLS法測定比較，分析時間由40 min縮短至1 min，RLS信號的重現性得到了顯著改善，提高了實驗的靈敏度和重現性[15]。梁宏等在普通螢光分光光度計上選擇合適的激發光和發射光通帶寬度，利用RLS技術，研究了生理pH值(7.43±0.02)，25 ℃下，金(Ⅲ)與血清白蛋白的相互作用。首次觀測到金(Ⅲ)對血清白蛋白的RLS強度隨著金(Ⅲ)濃度增加而降低。結果表明，金(Ⅲ)與血清白蛋白的結合會破壞血清白蛋白分子聚集，使血清白蛋白中的二硫橋鍵斷裂，導致白蛋白分子趨於鬆散，散射截面積減小，表現為RLS強度降低[16]。
1.2 核酸
核酸是遺傳信息的載體和基因表達的物質基礎，在生物的生長、發育等活動中具有十分重要的作用。目前核酸分析測定的方法主要有分光光度法、螢光光度法、化學發光法、探針技術法、免疫分析法等，其中分光光度法[17]和螢光光度法[18]使用較多。紫外分光光度法操作簡單，但由於靈敏度低，測定的干擾因素多，使其在應用上受到了限制;螢光分析法具有選擇性好和靈敏度高，但螢光試劑價格昂貴，而且部分螢光試劑有致癌活性。針對上述情況，RLS法因操作簡便快速，靈敏度高，試劑無毒性等優勢，在核酸分析中也得到了廣泛的應用。
黃承志等利用溴化十六烷基三甲銨(cetyltrimethylammonsium bromide,CTMAB)是陽離子表面活性劑，核酸因帶有大量的磷酸根而帶負電荷的特性，證明了CTMAB和核酸通過靜電引力共吸附到液/液介面上形成兩性復合物，導致強烈增加的全內反射共振光散射(total internal reflected resonance light scattering，TIRRLS)信號，TIRRLS信號強度與核酸的濃度呈線性[19]。劉紹璞等研究了5種陽離子表面活性劑與核酸反應的RLS光譜[20]。陳展光等首次利用諾氟沙星做為RLS光譜探針，測定了葉綠體脫氧核糖核酸(ctDNA)。在pH5.87的BR(BrittonRobinson)緩衝溶液中，波長405.5 nm處出現最大RLS峰，ctDNA的線性響應範圍為0.02～2.30 μg·mL-1，檢測限為1.2 ng·mL-1。還合成了希夫鹼試劑三(2(鄰羥基苯基亞甲氨基)乙基)胺，並且研究了其與核酸在鹽酸介質中的反應。對希夫鹼劑三(2(鄰羥基苯基亞甲氨基)乙基)胺DNA體系的研究發現，在393.0nm處增加的RLS強度與核酸的濃度成線性關係(ctDNA，0.01～4.50 μg·mL-1;fsDNA，0.01～5.00 μg·mL-1)。ctDNA的檢測限是1.4 ng·mL-1，fsDNA的檢測限是2.1 ng·mL-1。結果與紫外可見分光光度法測得結果一致 [21]。林楓等研究在pH4.0介質中加入DNA和陽離子表面活性劑可使二甲酚橙的RLS增強，據此建立了以二甲酚橙為分子探針測定DNA的分析方法，適用於合成樣品中的DNA測定[22]。
2 在化學藥分析中的應用
黃承志等利用具有雙親性的RhBCTMAB全內反射共振光散射法測定肝素，肝素通過與RhB和CTMAB相互作用形成三元雙親性的復合物RhB肝素CTMAB，而被RhB和CTMAB協同吸附在水/四氯化碳(H2O/CCl4)介面上，引起強烈的TIRRLS增強信號用於肝素的測定[19]。陳展光等在氧氟沙星茜素紫3B體系中發現，pH5.09的BR緩衝溶液中，在439.5 nm處，0.10～2.50 μg·mL-1範圍內的氧氟沙星與增加的RLS強度成線性關係。與此同時，在pH6.90，405.0 nm處，0.05～3.00 μg·mL-1範圍內的氧氟沙星與RLS強度成線性關係，檢測限分別為0.013 μg·mL-1，0.021 μg·mL-1[21]。氧氟沙星茜素紫3B體系可用於人體的氧氟沙星血藥濃度測定。還建立了人血清中抗菌類四季銨化合物的RLS技術檢測方法[23]。陳展光等，建立的二溴羥基苯基螢光酮(DBHPF)曲通(Triton)X100鉬的共振光散射光譜新體系，分析測定了中藥、頭髮以及水中的微量鉬[21]。劉雲富等研究發現在硫酸介質中，砷鉬雜多酸與鹼性染料RhB締合導致RhB體系的RLS強度減弱，在一定濃度範圍內，砷(Ⅴ)的含量與體系減弱的RLS強度成線性關係，據此建立了RLS技術測定砷(Ⅴ)的新方法[24]。
3 在中藥分析中的應用
黃承志等，研究了螢光素(Flu)小檗鹼(BE)全內反射共振光散射法測定小檗鹼。採用TIRRLS技術通過Flu與BE在水/1,2,二氯乙烷(H2O/DCE)介面反應研究了BE在介面上的特性。Flu與BE形成雙親性的復合物，在H2O/DCE介面富集，並引起強烈增加的TIRRLS信號，最大吸收波長位於373.0 nm，所得信號強度在一定範圍內與BE濃度成正比關係，檢測限為1.3 ng·mL-1。本方法與藥典使用的HPLC方法對照靈敏度有所提高 [19]。張憶華等，在pH為10.0的Tris緩衝溶液中建立了綠原酸CTMABctDNA體系，實驗表明，440.0 nm處增強的RLS光強度(ΔIRLS)穩定，在0.002～0.10μg·mL-1的濃度範圍內，體系ΔIRLS與ctDNA的濃度具有良好的線性關係，檢測限為0.6 ng·mL-1。在厚朴酚CTMABctDNA體系中，選擇pH值為10.0的Tris緩衝溶液來控制反應體系的酸度，356.0 nm作為定量分析的波長。在0.02～1.00 μg·mL-1的濃度範圍內，ΔIRLS與ctDNA的濃度具有良好的線性關係。在最佳反應條件，320.0 nm處，pH10.0時，兒茶素CTMABctDNA體系在0.02～1.00 μg·mL-1的濃度範圍內，ΔIRLS與ctDNA的濃度成線性關係。類似的實驗還有山柰酚CTMABctDNA體系。此外，張憶華還研究了三價稀土離子與槲皮素、山柰酚所形成的絡合物的RLS光譜，研究了ctDNA對它的淬滅作用。建立了Tb3+/Eu3+槲皮素ctDNA體系以及Tb3+/Eu3+山柰酚ctDNA體系，結果表明，槲皮素與山柰酚通過配位作用與Tb3+/Eu3+結合，引起體系RLS光強度的增加，而當加入ctDNA後，體系的RLS光強度降低，原因是ctDNA結構中的磷酸骨架可以與Tb3+和Eu3+發生螯合作用，導致溶液中ctDNA和山柰酚與Tb3+/Eu3+的競爭配位。該方法取得了明顯的實驗成果[25]。
4 結語
由於RLS技術是建立在普通光譜法基礎上，分析結果雖然是物質的散射光譜信息，但物質形態特徵等卻不能被獲取。基於此問題，一種結合顯微成像技術的共振光散射成像技術被建立起來，對生物大分子的聚集形態進行了深入的研究和探討[26]，儀器的性能和工作條件對所獲信號影響大。由於RLS光譜在較大光譜通帶下獲得，因而不利於光譜精細結構的研究。雖然我們知道散射光強度與散射粒子濃度有關，但出發點是從同步光譜開始的，顯然其測定公式推導並未涉及RLS的散射本質。因此，用於分析化學的RLS技術原理與定量基礎尚未有定論。雖然RLS技術作為一種新興的分析測定技術存在一些不足，但隨著RLS技術理論和應用上研究的深入，使RLS技術不斷朝著痕量、高效、微觀和自動化方向 發展 ，極大地提高了RLS技術分析法的靈敏度，選擇性和特異性，應用領域不斷擴大。已報道的有關藥物的RLS分析方法主要涉及如下藥物：肝素[27]、地喹氯銨[23]、鹽酸小檗鹼[28]、多糖[29]、蘆丁[30]、氨基糖苷抗生素[31]、青黴素[32]等。除了一些常規的測定藥物的RLS方法之外，近幾年還發展了以下幾種方法[12]： RLS成像技術、FIARLS技術、雙波長比率RLS技術等。RLS技術以其更靈敏、更方便，不需要螢光物質的特定體系等優勢，必將更好地為藥物分析測試服務。
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