作者：喬文濤，張靜，俞凌雁，馬婷婷，袁珂
【摘要】
目的研究提取純化含羞草中總黃酮的最佳工藝條件。方法以蘆丁為對照，含羞草總黃酮得率為考察指標，通過正交實驗法優選超聲提取總黃酮的最佳工藝。在此基礎上，採用真空薄膜濃縮，超聲脫色，大孔吸附樹脂Diaion HP-20吸附分離純化含羞草總黃酮提取物。結果最佳提取工藝為用10倍量的80%乙醇為溶劑超聲提取3次，10 min/次。最佳分離純化工藝為：採用大孔吸附樹脂Diaion HP-20進行分離富集，以不同濃度的乙醇進行梯度洗脫，洗脫流速為5 ml/min，收集40％～60％乙醇洗脫部位並減壓濃縮得總黃酮提取物，總黃酮的含量達到76％。結論優化了含羞草中總黃酮的提取純化方法，為含羞草資源的綜合利用和產業化開發提供了 參考 。
【關鍵詞】 含羞草 總黃酮 提取 純化
含羞草為豆科含羞草屬植物含羞草Mimosa pudica的全草［1］，又名知羞草、怕羞草、喝乎草、刺含羞草等。主要分布在我國華東、華南、西南等地的山坡叢林、濕地、路旁,具有清熱利尿、化痰止咳、安神止痛、涼血止血之功效，臨床多用於急性肝炎、神經衰弱、失眠、肺結核咳血、血尿、結膜炎、跌打損傷、帶狀皰疹等症［2］。含羞草中含有大量對人體有益的活性物質，包括黃酮類、酚類、生物活性多糖、胺基酸類、有機酸類和其它微量元素。其中的黃酮類化合物具有顯著的生理活性［3～5］，如抗脂質過氧化、抗衰老、清除自由基、抗腫瘤，降低血脂、抗菌抑菌、增強免疫力等作用。本文通過正交實驗考察了超聲提取含羞草總黃酮的工藝，同時採用大孔吸附樹脂進行吸附分離，並結合真空薄膜濃縮、超聲脫色等方法對含羞草提取物進行分離與純化，以期為 工業 化生產提供參考依據。
1 儀器與材料
1.1 儀器UV-2102PCS紫外可見分光光度計（上海龍尼柯儀器有限公司）；KQ-250B超聲波提取器（崑山市超聲儀器有限公司）；NJL07-3型實驗專用微波爐（南京傑全微波設備有限公司，額定功率800W）；Millipore Simplicity型超純水器（美國Millipore公司）；RE-52A旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；真空薄膜濃縮裝置［6］（自裝）；101-1型電熱恆溫乾燥箱；微量分析天平（EETTLER AE 240瑞士），微孔濾膜（上海醫藥工業研究院）；蘆丁對照品（ 中國 藥品生物製品鑑定所提供）。
1.2 材料與試劑
含羞草於2003-05采自海南三亞,由海南大學植物學教授黃世滿鑑定為豆科含羞草屬植物含羞草的全植株；所用試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 標準曲線的繪製
準確稱取乾燥恆重的蘆丁對照品12.8 mg，加60%乙醇（體積分數，下同）溶解並定容置100 ml的量瓶中，搖勻得質量濃度為0.128 g/L的對照品溶液。分別取上述蘆丁標準溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml於6只10 ml量瓶中，用60%乙醇補充至5 ml，各加入0.3 ml 5%亞硝酸鈉，搖勻，放置5 min後各加入10%硝酸鋁0.3 ml，搖勻。5 min後再加入1 mol/ml的氫氧化鈉溶液4 ml，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。10 min後於510 nm處測吸光度，試劑為空白參比，以蘆丁質量濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪製標準曲線，用最小二乘法進行線行回歸,得蘆丁含量與吸光度之間的回歸方程:A=9.049 1C+0.006 4, r=0.999 7。
2.2 不同溶劑提取所得提取物得率及總黃酮得率的比較
2.2.1 不同溶劑提取所得提取物的得率比較
稱取粉碎並過60目篩後的含羞草原料4份，每份20 g，分別選用50%的乙醇、80%的乙醇、甲醇、70%的丙酮4種不同的溶劑進行索氏提取，溶劑用量均為200 ml，提取時間為5 h。分別將提取液濃縮至稠膏狀移入烘箱中烘乾至恆重。稱重， 計算 得率。結果見表1。表1 不同溶劑提取所得提取物及得率的比較（略）
2.2.2 不同溶劑提取所得總黃酮的得率比較
分別吸取一定量由不同溶劑提取所製得的含羞草提取液於10 ml量瓶中，添加60%乙醇溶液使體積約為5 ml，按照上述繪製蘆丁標準曲線的方法，依次加入0.3 ml 5%亞硝酸鈉、0.3 ml 10%硝酸鋁、4 ml 1 mol/ml的氫氧化鈉溶液，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。靜置20 min後用紫外可見分光光度計法測定不同溶劑提取所得提取液的吸光度，重複3次測定，並根據標準曲線換算出總黃酮的得率，計算平均含量及RSD。結果見表2。表2 不同溶劑提取所得提取物中總黃酮的得率比較（略）
由表1可以看出，由4種不同的溶劑進行索氏提取，以70%丙酮進行提取所得提取物的得率為最高；由表2可以看出，以80%乙醇為溶劑進行提取，所得提取物中總黃酮得率相對最高。雖然以70%丙酮提取得率最高且總黃酮的得率與用80%乙醇提取相當，但考慮到乙醇與丙酮相比，具有無毒安全，廉價易得的優點，故提取溶劑選用80%乙醇。
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【摘要】
目的研究提取純化含羞草中總黃酮的最佳工藝條件。方法以蘆丁為對照，含羞草總黃酮得率為考察指標，通過正交實驗法優選超聲提取總黃酮的最佳工藝。在此基礎上，採用真空薄膜濃縮，超聲脫色，大孔吸附樹脂Diaion HP-20吸附分離純化含羞草總黃酮提取物。結果最佳提取工藝為用10倍量的80%乙醇為溶劑超聲提取3次，10 min/次。最佳分離純化工藝為：採用大孔吸附樹脂Diaion HP-20進行分離富集，以不同濃度的乙醇進行梯度洗脫，洗脫流速為5 ml/min，收集40％～60％乙醇洗脫部位並減壓濃縮得總黃酮提取物，總黃酮的含量達到76％。結論優化了含羞草中總黃酮的提取純化方法，為含羞草資源的綜合利用和產業化開發提供了 參考 。
【關鍵詞】 含羞草 總黃酮 提取 純化
含羞草為豆科含羞草屬植物含羞草Mimosa pudica的全草［1］，又名知羞草、怕羞草、喝乎草、刺含羞草等。主要分布在我國華東、華南、西南等地的山坡叢林、濕地、路旁,具有清熱利尿、化痰止咳、安神止痛、涼血止血之功效，臨床多用於急性肝炎、神經衰弱、失眠、肺結核咳血、血尿、結膜炎、跌打損傷、帶狀皰疹等症［2］。含羞草中含有大量對人體有益的活性物質，包括黃酮類、酚類、生物活性多糖、胺基酸類、有機酸類和其它微量元素。其中的黃酮類化合物具有顯著的生理活性［3～5］，如抗脂質過氧化、抗衰老、清除自由基、抗腫瘤，降低血脂、抗菌抑菌、增強免疫力等作用。本文通過正交實驗考察了超聲提取含羞草總黃酮的工藝，同時採用大孔吸附樹脂進行吸附分離，並結合真空薄膜濃縮、超聲脫色等方法對含羞草提取物進行分離與純化，以期為 工業 化生產提供參考依據。
1 儀器與材料
1.1 儀器UV-2102PCS紫外可見分光光度計（上海龍尼柯儀器有限公司）；KQ-250B超聲波提取器（崑山市超聲儀器有限公司）；NJL07-3型實驗專用微波爐（南京傑全微波設備有限公司，額定功率800W）；Millipore Simplicity型超純水器（美國Millipore公司）；RE-52A旋轉蒸發儀（上海亞榮生化儀器廠）；真空薄膜濃縮裝置［6］（自裝）；101-1型電熱恆溫乾燥箱；微量分析天平（EETTLER AE 240瑞士），微孔濾膜（上海醫藥工業研究院）；蘆丁對照品（ 中國 藥品生物製品鑑定所提供）。
1.2 材料與試劑
含羞草於2003-05采自海南三亞,由海南大學植物學教授黃世滿鑑定為豆科含羞草屬植物含羞草的全植株；所用試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 標準曲線的繪製
準確稱取乾燥恆重的蘆丁對照品12.8 mg，加60%乙醇（體積分數，下同）溶解並定容置100 ml的量瓶中，搖勻得質量濃度為0.128 g/L的對照品溶液。分別取上述蘆丁標準溶液0，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml於6只10 ml量瓶中，用60%乙醇補充至5 ml，各加入0.3 ml 5%亞硝酸鈉，搖勻，放置5 min後各加入10%硝酸鋁0.3 ml，搖勻。5 min後再加入1 mol/ml的氫氧化鈉溶液4 ml，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。10 min後於510 nm處測吸光度，試劑為空白參比，以蘆丁質量濃度為橫坐標，吸光度為縱坐標繪製標準曲線，用最小二乘法進行線行回歸,得蘆丁含量與吸光度之間的回歸方程:A=9.049 1C+0.006 4, r=0.999 7。
2.2 不同溶劑提取所得提取物得率及總黃酮得率的比較
2.2.1 不同溶劑提取所得提取物的得率比較
稱取粉碎並過60目篩後的含羞草原料4份，每份20 g，分別選用50%的乙醇、80%的乙醇、甲醇、70%的丙酮4種不同的溶劑進行索氏提取，溶劑用量均為200 ml，提取時間為5 h。分別將提取液濃縮至稠膏狀移入烘箱中烘乾至恆重。稱重， 計算 得率。結果見表1。表1 不同溶劑提取所得提取物及得率的比較（略）
2.2.2 不同溶劑提取所得總黃酮的得率比較
分別吸取一定量由不同溶劑提取所製得的含羞草提取液於10 ml量瓶中，添加60%乙醇溶液使體積約為5 ml，按照上述繪製蘆丁標準曲線的方法，依次加入0.3 ml 5%亞硝酸鈉、0.3 ml 10%硝酸鋁、4 ml 1 mol/ml的氫氧化鈉溶液，混勻，用60%乙醇稀釋至刻度。靜置20 min後用紫外可見分光光度計法測定不同溶劑提取所得提取液的吸光度，重複3次測定，並根據標準曲線換算出總黃酮的得率，計算平均含量及RSD。結果見表2。表2 不同溶劑提取所得提取物中總黃酮的得率比較（略）
由表1可以看出，由4種不同的溶劑進行索氏提取，以70%丙酮進行提取所得提取物的得率為最高；由表2可以看出，以80%乙醇為溶劑進行提取，所得提取物中總黃酮得率相對最高。雖然以70%丙酮提取得率最高且總黃酮的得率與用80%乙醇提取相當，但考慮到乙醇與丙酮相比，具有無毒安全，廉價易得的優點，故提取溶劑選用80%乙醇。
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