作者：肖威，斯拉甫·艾白，李治建
【摘要】 目的採用不同類型的炎症動物模型評價一枝蒿（AR）提取物的抗炎作用。方法採用二甲苯致小鼠耳腫脹實驗，角叉菜膠致大鼠足跖腫脹實驗、小鼠氣囊腫實驗、棉球肉芽腫實驗等。結果一枝蒿提取物對急性、慢性炎症及炎性滲出均有明顯的抑制作用，抑制炎症介質PGE2的產生，並抑制白細胞遊走。結論AR提取物具有明顯抗炎作用，其作用與抑制炎症介質PGE2產生有關。
【關鍵詞】 一枝蒿； 抗炎； 前列腺素E2
Abstract：ObjectiveTo investigate the anti-inflammatory effect of the extract of Artemisia rupestris L.(ARE) .MethodsFour typical inflammatory models were adopted to investigate the anti-inflammatory effect of ARE, namely dimethylbenzene-induced ear swelling in mice, carrageenan-induced paw edema, carrageenan-induced inflammatory exudation in air cyst of mice and cotton pellet granuloma.ResultsARE could obviously reduce the edema of ear and paw induced by dimethylbenzene or carrageenan respectively. It could also inhibit the hyperplasia induced by cotton pellet. ARE could inhibit the generation of PGE2 and reduce the number of WBC in inflammatory exudate.ConclusionARE effectively suppresses inflammatory responses. The mechanism of its anti-inflammatory action is relevant to reducing the generation of inflammation mediators, such as PGE2.
Key words：Artemisia rupestris L.; Anti-inflammation； PGE2
新疆一枝蒿Artemisia rupestris L.為菊科蒿屬植物。新疆地產藥材，維吾爾藥名「孜伙愛密尼」。維吾爾醫常用藥，用於 治療 熱性感冒、發熱、頭痛、胃痛、腹脹、肝炎、蕁麻疹、毒蟲咬傷等［1］。自20世紀80年代以來，多位國內學者對新疆一枝蒿的藥理作用做了研究，結果表明，新疆一枝蒿具有抗過敏、抗氧化、抗病毒、保肝降酶、調節免疫及健胃促消化等多種作用，臨床應用廣泛。本研究選擇具有不同代表性的炎症動物模型，首次對新疆一枝蒿提取物的抗炎作用作出評價，並對其作用機制進行初步探討。
1 材料與儀器
1.1 藥物與試劑新疆一枝蒿（AR）提取物，新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所提取純化得到, 按照《 中國 藥典》2000年版Ⅰ部附錄V B分光光度法測定，總黃酮及總酮酸含量合計高於50%以上。提取物以蒸餾水溶解稀釋成相應濃度。角叉菜膠（Carrageen）,為Sigma產品；吲哚美辛，新疆華康藥業有限責任公司提供，批號：070802；地塞米松，地奧集團成都藥業股份有限公司提供，批號：070403。
1.2 儀器GBC紫外分光光度計；數顯卡尺（上海九量五金工具有限公司）；TGL-16G冷凍超速離心機。
1.3 動物昆明種小鼠，18～22 g，♂；Wistar大鼠，180～220 g，♂;SD大鼠，150～180 g，♂。新疆實驗動物研究中心提供，許可證號：SYXK (新)2003-0003。
2 方法
2.1 二甲苯致小鼠耳腫脹實驗［2］昆明種小鼠60隻, 體重18～22g，隨機分為AR提取物高、中、低3個劑量組（300，200，100 mg·kg-1）、陽性對照地塞米松組（5 mg·kg-1）和模型對照組。AR提取物各劑量組均灌胃給藥，1次/d，共3 d；地塞米松組在第3天灌胃給藥1次。各組末次給藥後1 h，乙醚麻醉，每隻小鼠右耳正背面以微量移液器滴塗致炎劑-100%二甲苯0.02 ml/只，左耳不作處理。1h後將小鼠斷頸處死，沿耳廓基線剪下雙耳，用7 mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重。每鼠的右耳片減去左耳片的重量即為腫脹程度。 計算 各組腫脹度之均值、標準差與腫脹率。
腫脹度（%）=右耳片重量-左耳片重量左耳片重量×100%
2.2 角叉菜膠致大鼠足跖腫脹實驗［3］SD大鼠50隻，體重150～180 g, 隨機分為AR提取物高、中、低（300，200，100 mg/kg）3個劑量組、陽性對照吲哚美辛組(7.5 mg/kg)和模型對照組。分別ig給藥，1次/d，共7 d。給藥前以數顯卡尺測定各組右後足厚度，給藥後0.5 h，各鼠在右後足跖中部皮下注射1%角叉菜膠0.1 ml。致炎後1，2，3，4 h測定右後足厚度，計算腫脹率。4 h後處死，將致炎足自踝關節上0.5 cm處剪下，稱重，剝皮後剪碎皮膚及除骨骼以外的其它組織，置於裝有5 ml冰生理鹽水離心管中，浸泡（冰浴），不時振搖，1 h後4℃ 3 000 r/min離心浸泡液15 min，上清液-18℃冷凍備測。取上清液0.3 ml，加0.5 mol/L的KOH甲醇溶液2 ml, 50℃水浴異構化20 min，加甲醇5 ml稀釋。紫外可見分光光度法於278 nm處測定A值，以每克組織相當A值表示PGE2含量。
腫脹度（%）=致炎後足跖厚度-致炎前足跖厚度致炎前足跖厚度×100%
2.3 小鼠氣囊腫實驗［2］昆明種小鼠72隻，體重18～22 g, 隨機分為AR提取物高、中、低3個劑量組（300，200，100 mg/kg），陽性對照吲哚美辛組，模型對照組及空白對照組。各鼠背部皮下注射空氣5 ml（事先濾過無菌），分別於3 d及6 d再次注入空氣3 ml，維持氣囊膨脹。首次注入空氣當天，分別ig給藥, AR提取物高、中、低劑量組，1次/d。吲哚美辛組致炎前單次給藥1次，7.5 mg/kg。第6日，給藥2 h後，每鼠氣囊內注入1%角叉菜膠0.8 ml，空白對照組注入生理鹽水0.8 ml。6 h後處死，氣囊內注入冰生理鹽水（含肝素50 U/ml）2.5 ml，輕輕按壓，吸出滲出液約2 ml，1 600 r/min離心20 min（4℃），上清液分離備用，-80℃冷凍備測。取上清液0.3 ml於一試管中，加入0.5 mol/L的KOH甲醇溶液1.0 ml，50℃水浴20 min異構化，加甲醇2.5 ml，紫外分光光度法，波長278 nm比色，以吸光度值表示PGE2含量。沉澱以生理鹽水稀釋，作白細胞計數。
2.4 大鼠棉球植入肉芽腫試驗［3］選取雄性Wistar大鼠50隻，體重180～220 g, 隨機分為AR提取物高、中、低3個劑量組（140，70，35 mg/kg），模型對照組，陽性對照地塞米松組（1.5 mg/kg），ig給藥，1次/d，連續7 d。將已稱重棉球［（50±1） mg］，經高壓滅菌，每個棉球再加氨苄青黴素1 mg/0.1 ml,50℃烘箱烘乾。在首次給予受試物後1h，在乙醚淺麻醉無菌條件下作前肢腋下切口，將棉球植入大鼠兩側腋窩部皮下。第8天頸椎脫臼處死，取出棉球肉芽組織。於60℃烘箱內乾燥1h稱重，減去原棉球重量，即為肉芽腫凈重。肉芽腫重量以mg（肉芽腫）/100 g(體重)表示。
2.5 統計學處理所有數據均用±s表示，應用PEMS3.1統計軟體處理，經方差齊性檢驗，如方差齊性時用t檢驗，方差不齊時用t'檢驗。
3 結果
3.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響AR提取物的高、中、低劑量均可抑制二甲苯誘導的小鼠耳腫脹（P<0.01或P<0.05）。結果見表1。
表1 對小鼠耳腫脹的影響（略）
與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；n=12
3.2 對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響AR提取物可以抑制角叉菜膠誘導的大鼠足跖腫脹，高、中劑量組作用明顯（P<0.01），並呈一定量效關係。同時AR提取物組PGE2的產生明顯減少，與模型對照組比較P<0.01。結果見圖1，表2～3。
圖1 AR提取物在不同時間對大鼠足跖腫脹度影響（吲哚美辛7.5 mg/kg）（略）
3.3 小鼠氣囊腫實驗該動物模型是在角叉菜膠刺激下主要以炎性滲出為主要表現的炎症模型。表現為炎性細胞浸潤和前列腺素樣炎性介質增加。給予AR提取物可以有效抑制此種炎症反應，高、中劑量組顯著降低炎性滲出液中PGE2的含量（P<0.001），同時明顯減少氣囊滲出液中白細胞數目（P<0.05或P<0.01）。結果見表4。
【摘要】 目的採用不同類型的炎症動物模型評價一枝蒿（AR）提取物的抗炎作用。方法採用二甲苯致小鼠耳腫脹實驗，角叉菜膠致大鼠足跖腫脹實驗、小鼠氣囊腫實驗、棉球肉芽腫實驗等。結果一枝蒿提取物對急性、慢性炎症及炎性滲出均有明顯的抑制作用，抑制炎症介質PGE2的產生，並抑制白細胞遊走。結論AR提取物具有明顯抗炎作用，其作用與抑制炎症介質PGE2產生有關。
【關鍵詞】 一枝蒿； 抗炎； 前列腺素E2
Abstract：ObjectiveTo investigate the anti-inflammatory effect of the extract of Artemisia rupestris L.(ARE) .MethodsFour typical inflammatory models were adopted to investigate the anti-inflammatory effect of ARE, namely dimethylbenzene-induced ear swelling in mice, carrageenan-induced paw edema, carrageenan-induced inflammatory exudation in air cyst of mice and cotton pellet granuloma.ResultsARE could obviously reduce the edema of ear and paw induced by dimethylbenzene or carrageenan respectively. It could also inhibit the hyperplasia induced by cotton pellet. ARE could inhibit the generation of PGE2 and reduce the number of WBC in inflammatory exudate.ConclusionARE effectively suppresses inflammatory responses. The mechanism of its anti-inflammatory action is relevant to reducing the generation of inflammation mediators, such as PGE2.
Key words：Artemisia rupestris L.; Anti-inflammation； PGE2
新疆一枝蒿Artemisia rupestris L.為菊科蒿屬植物。新疆地產藥材，維吾爾藥名「孜伙愛密尼」。維吾爾醫常用藥，用於 治療 熱性感冒、發熱、頭痛、胃痛、腹脹、肝炎、蕁麻疹、毒蟲咬傷等［1］。自20世紀80年代以來，多位國內學者對新疆一枝蒿的藥理作用做了研究，結果表明，新疆一枝蒿具有抗過敏、抗氧化、抗病毒、保肝降酶、調節免疫及健胃促消化等多種作用，臨床應用廣泛。本研究選擇具有不同代表性的炎症動物模型，首次對新疆一枝蒿提取物的抗炎作用作出評價，並對其作用機制進行初步探討。
1 材料與儀器
1.1 藥物與試劑新疆一枝蒿（AR）提取物，新疆維吾爾自治區維吾爾醫藥研究所提取純化得到, 按照《 中國 藥典》2000年版Ⅰ部附錄V B分光光度法測定，總黃酮及總酮酸含量合計高於50%以上。提取物以蒸餾水溶解稀釋成相應濃度。角叉菜膠（Carrageen）,為Sigma產品；吲哚美辛，新疆華康藥業有限責任公司提供，批號：070802；地塞米松，地奧集團成都藥業股份有限公司提供，批號：070403。
1.2 儀器GBC紫外分光光度計；數顯卡尺（上海九量五金工具有限公司）；TGL-16G冷凍超速離心機。
1.3 動物昆明種小鼠，18～22 g，♂；Wistar大鼠，180～220 g，♂;SD大鼠，150～180 g，♂。新疆實驗動物研究中心提供，許可證號：SYXK (新)2003-0003。
2 方法
2.1 二甲苯致小鼠耳腫脹實驗［2］昆明種小鼠60隻, 體重18～22g，隨機分為AR提取物高、中、低3個劑量組（300，200，100 mg·kg-1）、陽性對照地塞米松組（5 mg·kg-1）和模型對照組。AR提取物各劑量組均灌胃給藥，1次/d，共3 d；地塞米松組在第3天灌胃給藥1次。各組末次給藥後1 h，乙醚麻醉，每隻小鼠右耳正背面以微量移液器滴塗致炎劑-100%二甲苯0.02 ml/只，左耳不作處理。1h後將小鼠斷頸處死，沿耳廓基線剪下雙耳，用7 mm直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重。每鼠的右耳片減去左耳片的重量即為腫脹程度。 計算 各組腫脹度之均值、標準差與腫脹率。
腫脹度（%）=右耳片重量-左耳片重量左耳片重量×100%
2.2 角叉菜膠致大鼠足跖腫脹實驗［3］SD大鼠50隻，體重150～180 g, 隨機分為AR提取物高、中、低（300，200，100 mg/kg）3個劑量組、陽性對照吲哚美辛組(7.5 mg/kg)和模型對照組。分別ig給藥，1次/d，共7 d。給藥前以數顯卡尺測定各組右後足厚度，給藥後0.5 h，各鼠在右後足跖中部皮下注射1%角叉菜膠0.1 ml。致炎後1，2，3，4 h測定右後足厚度，計算腫脹率。4 h後處死，將致炎足自踝關節上0.5 cm處剪下，稱重，剝皮後剪碎皮膚及除骨骼以外的其它組織，置於裝有5 ml冰生理鹽水離心管中，浸泡（冰浴），不時振搖，1 h後4℃ 3 000 r/min離心浸泡液15 min，上清液-18℃冷凍備測。取上清液0.3 ml，加0.5 mol/L的KOH甲醇溶液2 ml, 50℃水浴異構化20 min，加甲醇5 ml稀釋。紫外可見分光光度法於278 nm處測定A值，以每克組織相當A值表示PGE2含量。
腫脹度（%）=致炎後足跖厚度-致炎前足跖厚度致炎前足跖厚度×100%
2.3 小鼠氣囊腫實驗［2］昆明種小鼠72隻，體重18～22 g, 隨機分為AR提取物高、中、低3個劑量組（300，200，100 mg/kg），陽性對照吲哚美辛組，模型對照組及空白對照組。各鼠背部皮下注射空氣5 ml（事先濾過無菌），分別於3 d及6 d再次注入空氣3 ml，維持氣囊膨脹。首次注入空氣當天，分別ig給藥, AR提取物高、中、低劑量組，1次/d。吲哚美辛組致炎前單次給藥1次，7.5 mg/kg。第6日，給藥2 h後，每鼠氣囊內注入1%角叉菜膠0.8 ml，空白對照組注入生理鹽水0.8 ml。6 h後處死，氣囊內注入冰生理鹽水（含肝素50 U/ml）2.5 ml，輕輕按壓，吸出滲出液約2 ml，1 600 r/min離心20 min（4℃），上清液分離備用，-80℃冷凍備測。取上清液0.3 ml於一試管中，加入0.5 mol/L的KOH甲醇溶液1.0 ml，50℃水浴20 min異構化，加甲醇2.5 ml，紫外分光光度法，波長278 nm比色，以吸光度值表示PGE2含量。沉澱以生理鹽水稀釋，作白細胞計數。
2.4 大鼠棉球植入肉芽腫試驗［3］選取雄性Wistar大鼠50隻，體重180～220 g, 隨機分為AR提取物高、中、低3個劑量組（140，70，35 mg/kg），模型對照組，陽性對照地塞米松組（1.5 mg/kg），ig給藥，1次/d，連續7 d。將已稱重棉球［（50±1） mg］，經高壓滅菌，每個棉球再加氨苄青黴素1 mg/0.1 ml,50℃烘箱烘乾。在首次給予受試物後1h，在乙醚淺麻醉無菌條件下作前肢腋下切口，將棉球植入大鼠兩側腋窩部皮下。第8天頸椎脫臼處死，取出棉球肉芽組織。於60℃烘箱內乾燥1h稱重，減去原棉球重量，即為肉芽腫凈重。肉芽腫重量以mg（肉芽腫）/100 g(體重)表示。
2.5 統計學處理所有數據均用±s表示，應用PEMS3.1統計軟體處理，經方差齊性檢驗，如方差齊性時用t檢驗，方差不齊時用t'檢驗。
3 結果
3.1 對二甲苯致小鼠耳腫脹的影響AR提取物的高、中、低劑量均可抑制二甲苯誘導的小鼠耳腫脹（P<0.01或P<0.05）。結果見表1。
表1 對小鼠耳腫脹的影響（略）
與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001；n=12
3.2 對角叉菜膠致大鼠足腫脹的影響AR提取物可以抑制角叉菜膠誘導的大鼠足跖腫脹，高、中劑量組作用明顯（P<0.01），並呈一定量效關係。同時AR提取物組PGE2的產生明顯減少，與模型對照組比較P<0.01。結果見圖1，表2～3。
圖1 AR提取物在不同時間對大鼠足跖腫脹度影響（吲哚美辛7.5 mg/kg）（略）
3.3 小鼠氣囊腫實驗該動物模型是在角叉菜膠刺激下主要以炎性滲出為主要表現的炎症模型。表現為炎性細胞浸潤和前列腺素樣炎性介質增加。給予AR提取物可以有效抑制此種炎症反應，高、中劑量組顯著降低炎性滲出液中PGE2的含量（P<0.001），同時明顯減少氣囊滲出液中白細胞數目（P<0.05或P<0.01）。結果見表4。
收藏