[摘要] 在香菇菌液體發酵的基礎上，先對香菇菌種加硒馴化，再進行富硒香菇液體深層發酵的工藝條件實驗。 研究 香菇菌絲體在發酵過程中對有機硒的耐受力和生物轉化力。結果表明：經過馴化後的香菇菌在含有60 mg/kg 亞硒酸鈉(Na2SeO3)的固體培養基上和含有80 mg/kg亞硒酸鈉 (Na2SeO3) 的液體種子培養基及含有130 mg/kg亞硒酸鈉 (Na2SeO3) 的液體發酵培養基中生長良好，並可以在菌絲體內富集硒。
[關鍵詞] 富硒香菇；菌種加硒馴化；液體發酵
[Abstract] On the basis of lentinus edodes liquid fermentation, firstly domestication of selenium on lentinus edodes, then we performed deep fermentation technics experiments for lentinus edodes liquid of selenium-enriched, we studyed the tolerance and biotransformation of lentinus edodes mycelium to organic selenium in the process of fermentation. The results showed that lentinus edodes treated with selenium growed well in the solid mediums containing 60 mg/kg Na2SeO3, liquid seed mediums containing 80 mg/kg Na2SeO3 and liquid fermentation mediums containing 130 mg/kg Na2SeO3, and enrich selenium in the mycelium.
[Key words] Selenium-enriched Lentinus edodes; Bacterial domestication with selenium; Liquid fermentation
香菇（lentinus edodes）屬擔子菌綱傘菌目香菇屬。從香菇中提取的香菇多糖頗受醫藥學科研究工作者的重視，特別是富硒香菇多糖。據 現代 研究證實它具有較強的抗病毒、抗腫瘤、抗衰老等作用。是輔助性T細胞活性的恢復劑和巨噬細胞參與的T細胞免疫增強劑。但是，由於產量低價格昂貴，臨床 應用 受到一定限制[1-3]。
如果在香菇菌液體發酵時，把亞硒酸鈉添加到培養基中，通過菌絲細胞內物質代謝轉化，使有機硒結合到大分子活性物質上，成為有機硒多糖和硒蛋白。用這種 方法 得到的富硒香菇產品，較栽培法具有周期短，效率高，成本低等優點，是食藥兩用的優良產品。
本實驗在原香菇菌深層發酵的基礎上，對富硒香菇的液體發酵條件，進行了初步的探討。
1實驗材料
1.1出發菌株
由本室提供
1.2培養基
1.2.1基礎斜面培養基（PDA）土豆（去皮）200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、磷酸二氫鉀（KH2PO4）3 g、硫酸鎂（MgSO4·7H2O）1.5 g、水1 L、pH6.0。
1.2.2基礎種子培養基蔗糖20 g、葡萄糖20 g、黃豆餅粉10 g（浸出液）、 酵母粉4 g(酶解)、蛋白凍2 g、玉米粉10 g、磷酸二氫鉀（KH2PO4）1 g、硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.6 g、水1 L、pH6.0。
1.2.3基礎發酵培養基蔗糖20 g、葡萄糖20 g、黃豆餅粉15 g（不必製成浸出液）、 酵母粉4 g(酶解)、蛋白凍2 g、玉米粉10 g、磷酸二氫鉀（KH2PO4）1 g、硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.6 g、 水1 L、pH6.0。
1.3化學試劑
亞硒酸鈉(Na2SeO3)及其他化學試劑均為國產 分析 純。
2實驗方法
2.1 香菇菌種加硒馴化
將4℃冰箱保存的香菇菌，接種到基礎斜面培養基上，進行活化培養，傳至3代後，菌絲生長豐滿，為實驗用斜面。採用梯度法，在固體培養基中逐步增加硒的含量，濃度分別為20、40、60、80、100 mg/kg Na2SeO3誘導菌絲體對硒的耐受能力。方法為：將活化好的母斜面在無菌條件下，取適量菌絲，接種到含硒20 mg/kg的斜面培養基上，26℃恆溫培養。72 h後，每隔24 h觀察一次菌絲生長情況。當菌絲長滿斜面時，再接入到含硒40 mg/kg斜面培養基上培養。以此類推逐級馴化，每個梯度接種5支斜面並根據菌絲生長情況進行重複培養。
2.2搖瓶種子培養
在500 ml三角瓶內，裝入80 ml分別含有 60、 70、 80、 90、100 mg/kg Na2SeO3種子培養基，以無硒種子培養基作對照，取經過初步馴化的香菇菌斜面，挖塊約1 cm2接入瓶內，置26℃恆溫搖床，170 r/min，培養7 h，測定菌絲乾重。
2.3搖瓶發酵培養
在500 ml三角瓶內，裝入100 ml分別含有70、90、110、130、150、170 mg/kg Na2SeO3發酵培養基, 以無硒發酵培養基作對照，將加硒培養的種子液接入發酵瓶內。初始pH值6.0，26℃恆溫搖床170 r/min，培養7 h，測定菌絲乾重。每個梯度重複3個樣本，重複3批，取平均值。
2. 4分析測定
2.4.1菌絲乾重測定 取發酵液100 ml, 經5 000 r/min離心15 min，收集沉澱菌絲體60℃烘乾至恆重， 電子 天平稱重。
2.4.2菌絲體內硒含量測定 由 中國 疾病預防控制中心營養與食品安全研究所測定。
2.4.3 pH值測定 pH酸度計。
[關鍵詞] 富硒香菇；菌種加硒馴化；液體發酵
[Abstract] On the basis of lentinus edodes liquid fermentation, firstly domestication of selenium on lentinus edodes, then we performed deep fermentation technics experiments for lentinus edodes liquid of selenium-enriched, we studyed the tolerance and biotransformation of lentinus edodes mycelium to organic selenium in the process of fermentation. The results showed that lentinus edodes treated with selenium growed well in the solid mediums containing 60 mg/kg Na2SeO3, liquid seed mediums containing 80 mg/kg Na2SeO3 and liquid fermentation mediums containing 130 mg/kg Na2SeO3, and enrich selenium in the mycelium.
[Key words] Selenium-enriched Lentinus edodes; Bacterial domestication with selenium; Liquid fermentation
香菇（lentinus edodes）屬擔子菌綱傘菌目香菇屬。從香菇中提取的香菇多糖頗受醫藥學科研究工作者的重視，特別是富硒香菇多糖。據 現代 研究證實它具有較強的抗病毒、抗腫瘤、抗衰老等作用。是輔助性T細胞活性的恢復劑和巨噬細胞參與的T細胞免疫增強劑。但是，由於產量低價格昂貴，臨床 應用 受到一定限制[1-3]。
如果在香菇菌液體發酵時，把亞硒酸鈉添加到培養基中，通過菌絲細胞內物質代謝轉化，使有機硒結合到大分子活性物質上，成為有機硒多糖和硒蛋白。用這種 方法 得到的富硒香菇產品，較栽培法具有周期短，效率高，成本低等優點，是食藥兩用的優良產品。
本實驗在原香菇菌深層發酵的基礎上，對富硒香菇的液體發酵條件，進行了初步的探討。
1實驗材料
1.1出發菌株
由本室提供
1.2培養基
1.2.1基礎斜面培養基（PDA）土豆（去皮）200 g、葡萄糖20 g、瓊脂20 g、磷酸二氫鉀（KH2PO4）3 g、硫酸鎂（MgSO4·7H2O）1.5 g、水1 L、pH6.0。
1.2.2基礎種子培養基蔗糖20 g、葡萄糖20 g、黃豆餅粉10 g（浸出液）、 酵母粉4 g(酶解)、蛋白凍2 g、玉米粉10 g、磷酸二氫鉀（KH2PO4）1 g、硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.6 g、水1 L、pH6.0。
1.2.3基礎發酵培養基蔗糖20 g、葡萄糖20 g、黃豆餅粉15 g（不必製成浸出液）、 酵母粉4 g(酶解)、蛋白凍2 g、玉米粉10 g、磷酸二氫鉀（KH2PO4）1 g、硫酸鎂（MgSO4·7H2O）0.6 g、 水1 L、pH6.0。
1.3化學試劑
亞硒酸鈉(Na2SeO3)及其他化學試劑均為國產 分析 純。
2實驗方法
2.1 香菇菌種加硒馴化
將4℃冰箱保存的香菇菌，接種到基礎斜面培養基上，進行活化培養，傳至3代後，菌絲生長豐滿，為實驗用斜面。採用梯度法，在固體培養基中逐步增加硒的含量，濃度分別為20、40、60、80、100 mg/kg Na2SeO3誘導菌絲體對硒的耐受能力。方法為：將活化好的母斜面在無菌條件下，取適量菌絲，接種到含硒20 mg/kg的斜面培養基上，26℃恆溫培養。72 h後，每隔24 h觀察一次菌絲生長情況。當菌絲長滿斜面時，再接入到含硒40 mg/kg斜面培養基上培養。以此類推逐級馴化，每個梯度接種5支斜面並根據菌絲生長情況進行重複培養。
2.2搖瓶種子培養
在500 ml三角瓶內，裝入80 ml分別含有 60、 70、 80、 90、100 mg/kg Na2SeO3種子培養基，以無硒種子培養基作對照，取經過初步馴化的香菇菌斜面，挖塊約1 cm2接入瓶內，置26℃恆溫搖床，170 r/min，培養7 h，測定菌絲乾重。
2.3搖瓶發酵培養
在500 ml三角瓶內，裝入100 ml分別含有70、90、110、130、150、170 mg/kg Na2SeO3發酵培養基, 以無硒發酵培養基作對照，將加硒培養的種子液接入發酵瓶內。初始pH值6.0，26℃恆溫搖床170 r/min，培養7 h，測定菌絲乾重。每個梯度重複3個樣本，重複3批，取平均值。
2. 4分析測定
2.4.1菌絲乾重測定 取發酵液100 ml, 經5 000 r/min離心15 min，收集沉澱菌絲體60℃烘乾至恆重， 電子 天平稱重。
2.4.2菌絲體內硒含量測定 由 中國 疾病預防控制中心營養與食品安全研究所測定。
2.4.3 pH值測定 pH酸度計。
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