作者：謝水林，王翌堯，譚玉溪，盧沛楓，田春娟，戴仁科
【摘要】 目的 研究荷葉鹼在大鼠體內的藥動學特徵及其絕對生物利用度。 方法 SD大鼠分別靜脈注射 (5 mg·kg-1)和口服(20 mg·kg-1)荷葉鹼，給藥後不同時間點取血，分離血漿，LCMS/MS法測定血漿中荷葉鹼的藥物濃度，用DAS軟體處理數據並 計算 藥動學參數，求其絕對生物利用度。結果 靜脈注射荷葉鹼的藥動學參數： AUC(0-∞)為(1 118.24±420.90) ng·h·mL-1,Cmax為(1 213.17±359.29) ng·mL-1，t1/2為(1.30±0.69) h;口服荷葉鹼的藥動學參數：AUC(0-∞)為(3 111.34±1 986.29) ng·h·mL-1，Cmax為(1 257.50±942.37) ng·mL-1,t1/2為(4.89±2.88) h,tmax為(0.33±0.18) h;劑量歸一法計算得荷葉鹼在大鼠體內的絕對生物利用度為69.56%。結論 該方法專屬性強，靈敏度高，可用於荷葉鹼的體內定量分析。
【關鍵詞】 荷葉鹼;藥動學;絕對生物利用度;LCMS/MS法
Abstract:Objective To investigate the pharmacokinetic characteristics of nuciferine and its absolute bioavailability in rats.Methods I.v.(5 mg·kg-1) and p.o. (20 mg·kg-1) administration were given to SD rats respectively, and the plasma concentration of nuciferine in rats was determined by LCMS/MS.Results The main pharmacokinetic parameters through i.v. and p.o. were as followed: respectively, AUC(0-∞)(1 118.24±420.90) and (3 111.34±1986.29) ng·h·mL-1, Cmax (1 213.17±359.29) and (1 257.50±942.37) ng·mL-1;t1/2 (1.30±0.69) and (4.89±2.88) h. tmax was (0.33±0.18) h via p.o.. The absolute bioavailability was 69.56% after dosage correction.Conclusion This method is specific and sensitive, suitable for in vitro determination of nuciferine.
Key words:nuciferine; pharmacokinetics; absolute bioavailability;LCMS/MS
荷葉為睡蓮科蓮屬植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn)的葉，味苦，平，歸肝、脾、胃經，具有清暑利濕、升發清陽、清心去熱、止血利水的功效。荷葉鹼(nuciferine)作為荷葉的主要活性成分，具有降脂減肥、抑菌、抗病毒等藥理活性[1～3]。有關荷葉鹼的絕對生物利用度的研究尚未見 文獻 報道。本實驗採用高效液相串聯質譜法分別測定大鼠靜脈注射和口服荷葉鹼後的血藥濃度，並對其體內藥動學過程和絕對生物利用度進行了研究，為荷葉生物鹼提取物進一步的臨床應用提供依據。
1 材料與方法
1.1 實驗材料
1.1.1 主要儀器 API3000型三重四極串聯質譜儀(美國Applied Biosystem公司);LC20AD高效液相色譜儀(島津);LNGT83真空離心濃縮系統(國產);AND微量 電子 天平(日本);3k15高速台式離心機(美國Sigma公司)。
1.1.2 藥品與試劑 荷葉鹼對照品( 中國 藥品生物製品檢定所，批號：111566200402);內標非那西丁(中國藥品生物製品檢定所，批號：100783200401);甲醇、乙酸乙酯、乙腈均為色譜純，其它試劑為分析純。
1.1.3 實驗動物 健康SD大鼠12隻，雌雄各半，體質量(200+10)g，購自南方醫科大學實驗動物中心(證號為SCXK粵2006-0015)，實驗前12 h禁食不禁水。
1.2 實驗方法
1.2.1 動物實驗方案 12隻SD大鼠，雌雄各半，體質量(210±5)g，稱重後隨機分成兩組：一組靜脈給藥(5 mg/kg)，另一組口服給藥(20 mg/kg)，給藥後0.033、0.17、0.5、1、1.5、2、4、8、12、24 h 經眼眶靜脈取血約0.3 mL，置於有肝素的1.5 mL的EP管中，分離血漿後置於-20 ℃保存。
1.2.2 對照品溶液及內標溶液的製備 精密稱取荷葉鹼對照品，用甲醇溶解配製成100 μg/mL的對照品貯備液。臨用時採用流動相甲醇水(體積比1∶1)按倍數稀釋法配成一系列質量濃度為1、3、10、30、100、300、1 000、3 000 ng/mL的荷葉鹼對照品溶液作為標準工作液備用。另取適量的非那西丁作為內標，用乙腈溶解並稀釋成100 ng/mL的溶液備用。
1.2.3 血漿樣品處理方法 取血漿樣品100 μL，加入100 μL的甲醇水(體積比1∶1)溶液，20 μL的非那西丁內標液，渦流混合1 min，然後加入800 μL乙酸乙酯，渦流5 min,離心10 min(14 000 r/min)，取上層有機相，置離心濃縮儀中吹乾，殘渣用甲醇水(體積比1∶1)溶液定容至100 μL，取20 μL進樣。
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【摘要】 目的 研究荷葉鹼在大鼠體內的藥動學特徵及其絕對生物利用度。 方法 SD大鼠分別靜脈注射 (5 mg·kg-1)和口服(20 mg·kg-1)荷葉鹼，給藥後不同時間點取血，分離血漿，LCMS/MS法測定血漿中荷葉鹼的藥物濃度，用DAS軟體處理數據並 計算 藥動學參數，求其絕對生物利用度。結果 靜脈注射荷葉鹼的藥動學參數： AUC(0-∞)為(1 118.24±420.90) ng·h·mL-1,Cmax為(1 213.17±359.29) ng·mL-1，t1/2為(1.30±0.69) h;口服荷葉鹼的藥動學參數：AUC(0-∞)為(3 111.34±1 986.29) ng·h·mL-1，Cmax為(1 257.50±942.37) ng·mL-1,t1/2為(4.89±2.88) h,tmax為(0.33±0.18) h;劑量歸一法計算得荷葉鹼在大鼠體內的絕對生物利用度為69.56%。結論 該方法專屬性強，靈敏度高，可用於荷葉鹼的體內定量分析。
【關鍵詞】 荷葉鹼;藥動學;絕對生物利用度;LCMS/MS法
Abstract:Objective To investigate the pharmacokinetic characteristics of nuciferine and its absolute bioavailability in rats.Methods I.v.(5 mg·kg-1) and p.o. (20 mg·kg-1) administration were given to SD rats respectively, and the plasma concentration of nuciferine in rats was determined by LCMS/MS.Results The main pharmacokinetic parameters through i.v. and p.o. were as followed: respectively, AUC(0-∞)(1 118.24±420.90) and (3 111.34±1986.29) ng·h·mL-1, Cmax (1 213.17±359.29) and (1 257.50±942.37) ng·mL-1;t1/2 (1.30±0.69) and (4.89±2.88) h. tmax was (0.33±0.18) h via p.o.. The absolute bioavailability was 69.56% after dosage correction.Conclusion This method is specific and sensitive, suitable for in vitro determination of nuciferine.
Key words:nuciferine; pharmacokinetics; absolute bioavailability;LCMS/MS
荷葉為睡蓮科蓮屬植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn)的葉，味苦，平，歸肝、脾、胃經，具有清暑利濕、升發清陽、清心去熱、止血利水的功效。荷葉鹼(nuciferine)作為荷葉的主要活性成分，具有降脂減肥、抑菌、抗病毒等藥理活性[1～3]。有關荷葉鹼的絕對生物利用度的研究尚未見 文獻 報道。本實驗採用高效液相串聯質譜法分別測定大鼠靜脈注射和口服荷葉鹼後的血藥濃度，並對其體內藥動學過程和絕對生物利用度進行了研究，為荷葉生物鹼提取物進一步的臨床應用提供依據。
1 材料與方法
1.1 實驗材料
1.1.1 主要儀器 API3000型三重四極串聯質譜儀(美國Applied Biosystem公司);LC20AD高效液相色譜儀(島津);LNGT83真空離心濃縮系統(國產);AND微量 電子 天平(日本);3k15高速台式離心機(美國Sigma公司)。
1.1.2 藥品與試劑 荷葉鹼對照品( 中國 藥品生物製品檢定所，批號：111566200402);內標非那西丁(中國藥品生物製品檢定所，批號：100783200401);甲醇、乙酸乙酯、乙腈均為色譜純，其它試劑為分析純。
1.1.3 實驗動物 健康SD大鼠12隻，雌雄各半，體質量(200+10)g，購自南方醫科大學實驗動物中心(證號為SCXK粵2006-0015)，實驗前12 h禁食不禁水。
1.2 實驗方法
1.2.1 動物實驗方案 12隻SD大鼠，雌雄各半，體質量(210±5)g，稱重後隨機分成兩組：一組靜脈給藥(5 mg/kg)，另一組口服給藥(20 mg/kg)，給藥後0.033、0.17、0.5、1、1.5、2、4、8、12、24 h 經眼眶靜脈取血約0.3 mL，置於有肝素的1.5 mL的EP管中，分離血漿後置於-20 ℃保存。
1.2.2 對照品溶液及內標溶液的製備 精密稱取荷葉鹼對照品，用甲醇溶解配製成100 μg/mL的對照品貯備液。臨用時採用流動相甲醇水(體積比1∶1)按倍數稀釋法配成一系列質量濃度為1、3、10、30、100、300、1 000、3 000 ng/mL的荷葉鹼對照品溶液作為標準工作液備用。另取適量的非那西丁作為內標，用乙腈溶解並稀釋成100 ng/mL的溶液備用。
1.2.3 血漿樣品處理方法 取血漿樣品100 μL，加入100 μL的甲醇水(體積比1∶1)溶液，20 μL的非那西丁內標液，渦流混合1 min，然後加入800 μL乙酸乙酯，渦流5 min,離心10 min(14 000 r/min)，取上層有機相，置離心濃縮儀中吹乾，殘渣用甲醇水(體積比1∶1)溶液定容至100 μL，取20 μL進樣。
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