【摘要】目的建立歸芪生血顆粒（黃芪、枸杞子、火麻仁、當歸、五味子等）質量標準。 方法 採用薄層色譜法對顆粒中的黃芪、枸杞子、火麻仁、當歸、五味子進行了定性鑑別；採用高效液相色譜-蒸發光散射檢測器（HPLC-ELSD）測定了製劑中黃芪甲苷的含量。結果薄層斑點清晰，黃芪甲苷在0.500 1～10.002 μg範圍內呈良好的線性關係，平均回收率為98.83%，RSD=1.13 %。結論方法簡便，準確，可供本品質量控制。
【關鍵詞】歸芪生血顆粒； 薄層色譜； 高效液相色譜-蒸發光散射檢測器； 黃芪甲苷
Study on Quality Standard for Guiqishengxue Granules
Abstract：ObjectiveTo establish the quality control standard of Guiqishengxue Granules(Radix Astragali, Fructus Lycii, Fructus Cannabis, Radix Angelicae Sinenis, Fructus Schisandra-e, etc.). Methods Radix Astragali, Fructus Lycii, Fructus Cannabis, Radix Angelicae Si-nenis, Fructus Schisandrae were identified by TLC. The content of Astragaloside IV was determined by HPLC-ELSD. ResultsThe TLC spots developed was fairly clear. The Astragaloside IV showed good linear relationship at a range of 0.500 1～10.002 μg. The average recovery was 98.83% with RSD was 1.13%. ConclusionThe method is simple, accurate and can be applied to the control of the products effectively.
Key words：Guiqishengxue Granules; TLC; HPLC-ELSD; Astragaloside IV
歸芪生血顆粒主要由黃芪、枸杞子、生地、天冬、火麻仁、當歸、桃仁、紅花、五味子等9味中藥組成。具有健脾益腎，調暢氣血的作用，適用於脾腎不足、氣血虧虛、肌膚失養所致顏麵皮膚干黃，彈性降低，皮膚鬆弛等症。為了有效控制藥物質量，對歸芪生血顆粒中黃芪、枸杞子、火麻仁、當歸、五味子進行定性 研究 ，採用HPLC－ELSD法對黃芪的主要成分黃芪甲苷進行含量測定，以期更好地控制該藥物的質量。
1 儀器與試藥
儀器：島津LC-10AT，7725i定量進樣閥，島津C-R7Ae型數字處理機，法國SEDEX 55型蒸發光散射檢測器（ELSD）；對照品黃芪甲苷（含量測定用），枸杞、火麻仁、當歸、五味子對照藥材（以上對照品和對照藥材均購於 中國 藥品生物製品檢定所）；使用的化學試劑均為 分析 純，矽膠G（青島海洋化工廠），自製矽膠板（10 cm×10 cm×0.6 mm）；試驗樣品歸芪生血顆粒（自製）；陰性樣品依處方除去被檢藥材按製備工藝製成。
2 方法與結果
2.1 定性鑑別
2.1.1 黃芪的鑑別取本品20 g，研細，加溫水50 ml使溶解，放冷，離心，取上清液，加乙醚提取3次，20 ml/次，合併乙醚液，另器收集；揮盡水層中乙醚，加水飽和的正丁醇提取3次，20 ml/次，合併正丁醇提取液，用正丁醇飽和的1%NaOH溶液洗滌3次，20 ml/次，再用正丁醇飽和的水洗滌3次，30 ml/次，正丁醇提取液置水浴上蒸乾，殘渣加甲醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪陰性樣品20 g，同法製成陰性對照溶液。再取黃芪甲苷對照品，加甲醇製成每毫升含1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄VIB試驗，吸取供試品溶液、陰性對照溶液各10 μl,對照品溶液5 μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（10∶20∶11∶5）10℃下層液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照樣品在相應位置無此斑點。見圖1。
2.1.2 枸杞子的鑑別取本品10 g，研細，加熱水50 ml使溶解，放冷，離心，取上清液用醋酸乙酯40 ml振搖提取，提取液濃縮至約1.5 ml，作為供試品溶液。另取枸杞子陰性樣品，同法製成陰性對照溶液。再取枸杞子對照藥材0.5 g，加水35 ml，煮沸15 min，放冷，濾過，濾液用醋酸乙酯15 ml振搖提取，提取液濃縮至約1 ml，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄VIB試驗，吸取供試品溶液、陰性對照溶液、對照藥材溶液各5 μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（3∶2∶0.1）為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的螢光斑點。陰性對照樣品在相應位置無此斑點。見圖2。
圖1 黃芪的鑑別（略）
圖2 枸杞子的鑑別（略）
2.1.3 火麻仁的鑑別取火麻仁對照藥材0.5 g，加醋酸乙酯20ml，超聲提取30 min，濾過，濾液揮干，殘渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄VIB試驗，吸取定性分析2.2項下供試品溶液20 μl，對照藥材溶液、陰性對照溶液各5 μl，分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠GF-254薄層板上，以環己烷-丙酮（23∶3）為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照樣品在相應位置無此斑點。見圖3。
2.1.4 當歸的鑑別取定性分析2.1項下另器收集的乙醚液， 自然 揮干，殘渣加乙醇1 ml使溶解，作為供試品溶液。另取當歸陰性樣品，同法製成陰性對照溶液。再取當歸對照藥材1 g，加乙醚20 ml，超聲提取15 min，濾過，濾液自然揮干，殘渣加乙醇1 ml使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄VIB試驗，吸取供試品溶液、陰性對照溶液、對照藥材溶液各5μl，分別點於同一矽膠G薄層板上，以正己烷-醋酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾乾，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的螢光斑點。陰性對照樣品在相應位置無此斑點。見圖4。
2.1.5 五味子的鑑別 取本品20 g，加氯仿100 ml，回流提取1.5 h，濾過，濾液濃縮至約1 ml，作為供試品溶液。另取五味子陰性樣品20 g，同法製成陰性對照溶液。再取五味子對照藥材0.5 g，加氯仿100 ml，回流提取1.5h，濾過，濾液濃縮至約1 ml，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法《中國藥典》2005年版Ⅰ部附錄VIB試驗，吸取供試品溶液、陰性對照溶液、對照藥材溶液各5μl，分別點於同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的矽膠GF-254薄層板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）的上層液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以5%磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應位置上，顯相同顏色的斑點。陰性對照樣品在相應位置無此斑點。見圖5。
圖3 火麻仁的鑑別（略）
圖4 當歸的鑑別（略）
圖5 五味子的鑑別（略）
2.2 定量分析
2.2.1 色譜條件美國Phenomenex公司LUNA 5u C18（2）色譜柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流動相採用甲醇-水（75∶25），流速為1.0 ml/min，ELSD檢測器漂移管溫度為40℃，載氣（氮氣）流速為2.0bar。
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