作者：趙曉華，王一飛，劉秋英，安衛征
【摘要】
通過單因素和正交實驗,以多糖得率為指標,確定山茱萸多糖的最佳提取工藝,同時對山茱萸多糖理化性質進行分析,結果表明，山茱萸多糖最佳水提工藝條件:溫度80℃，料液比1∶60，時間5 h, 在此條件下山茱萸多糖得率是13.8%,經DEAE-52纖維素離子交換和SephadexG-200柱層析法得到組分S21, 經元素分析儀測定C%37.80%，H%5.64%，S%0.37%，N未檢出。
【關鍵詞】 山茱萸多糖; 提取； 分離純化； 理化性質
中藥山茱萸為山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb.et Zuce的乾燥成熟果實，主要產於浙江、安徽、河南等地。其味酸澀，性微溫，歸肝腎經，具有補益肝腎，收斂固澀的作用。 現代 藥理研究表明山茱萸果肉及果核中含有豐富的糖類和多種胺基酸、VitB1、VitB12等［1］。山茱萸多糖具有免疫調節活性及明顯的抗氧化作用［2，3］隨著我國社會 經濟 文化的 發展 ，人們的生活質量普遍提高，因此具有保健預防功能的山茱萸越來越引起國人的重視。本實驗以多糖得率為指標，採用正交實驗對山茱萸多糖的提取工藝進行優選，以期找出合理可行的製備工藝並研究分析其部分理化性質。
1 器材和方法
1.1 材料
供試山茱萸乾燥果實產於安徽,購於廣州中醫藥大學大藥房有限公司中藥飲片廠，將山茱萸原料粉碎,置乾燥器中備用。
1.2 試劑
濃硫酸，質量分數為6%的苯酚(分析純重蒸餾試劑),質量分數為95%的乙醇,氯仿,正丁醇,葡萄糖, 氯化鈉等,以上試劑均為分析純。
1.3 儀器
核酸蛋白測定儀,德國Hettich公司；自動收樣器,美國Whaters公司；AlphaI- 2 型真空凍干機,德國Christ公司；電熱恆溫水槽(DK8D型), 上海森信實驗儀器有限公司；高速冷凍離心機,德國Hettich公司。
1.4 方法
1.4.1 粗多糖樣品的製備
山茱萸乾粉,不同條件加熱(攪拌)浸提,離心,上清液加熱濃縮至體積的1/4,95%乙醇沉澱至75% (V/V)，4℃靜置過夜, 離心,取沉澱,丙酮乙醚無水乙醇溶劑系統反覆沖洗,真空冷凍乾燥得到粗多糖樣品。
1.4.2 山茱萸多糖含量測定［4］
採用苯酚-硫酸法, 以葡萄糖為標準單糖製作標準曲線，得回歸方程為：Y=0.007 7X+0.025 7, R2=0.999 5 ［多糖的量（μg）為橫坐標，光密度值為縱坐標］。
準確稱取粗多糖樣品6 mg,加蒸餾水至50 ml,配成120 μg/ml的樣品溶液。吸取樣品液1.0 ml，按標準曲線同法操作，測光密度，以標準曲線 計算 總糖含量。
1.4.3 得率的計算山茱萸多糖得率(%)=山茱萸粗多糖樣品中總糖含量(g)/山茱萸原料質量(g)×100%。
1.4.4 單因素分析及正交實驗
本實驗選取溫度、時間、料液比、pH值這4個因素進行分析,並從中選取3個因素水平根據單因素分析結果, 採用L9(34)表做正交實驗,以多糖提取率作為衡量提取效率的客觀指標，以確定最佳提取工藝。
1.4.5 山茱萸多糖的分離純化
按最佳提取工藝流程,將提取的紅褐色山茱萸粗多糖(ZA)復溶於水, 用Sevag［5］法除蛋白,重複3次,加95%乙醇至30%,離心,得到粗多糖(ZB),上清液繼續加95%乙醇至60%,4℃靜置過夜, 丙酮-乙醚-無水乙醇溶劑系統反覆沖洗,真空冷凍乾燥,得到粗多糖樣品(ZC)。稱取樣品AC 200 mg,溶於100 ml蒸餾水中,然後加到DEAE-cellulose-52離子交換柱洗脫(2.6 cm×26 cm)上,依次用蒸餾水及0.1，0.3，0.5，0.8，1.0 mol/L的NaCl水溶液洗脫,多功能 電子 蠕動泵控制流速為1 ml/min,用自動收集儀收集,苯酚-硫酸法跟蹤檢測多糖,合併各吸收峰的洗脫液,蒸餾水透析3 d，旋轉蒸發儀濃縮,冷凍乾燥,得到山茱萸多糖的兩個分離產物S1 和S2。
【摘要】
通過單因素和正交實驗,以多糖得率為指標,確定山茱萸多糖的最佳提取工藝,同時對山茱萸多糖理化性質進行分析,結果表明，山茱萸多糖最佳水提工藝條件:溫度80℃，料液比1∶60，時間5 h, 在此條件下山茱萸多糖得率是13.8%,經DEAE-52纖維素離子交換和SephadexG-200柱層析法得到組分S21, 經元素分析儀測定C%37.80%，H%5.64%，S%0.37%，N未檢出。
【關鍵詞】 山茱萸多糖; 提取； 分離純化； 理化性質
中藥山茱萸為山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Sieb.et Zuce的乾燥成熟果實，主要產於浙江、安徽、河南等地。其味酸澀，性微溫，歸肝腎經，具有補益肝腎，收斂固澀的作用。 現代 藥理研究表明山茱萸果肉及果核中含有豐富的糖類和多種胺基酸、VitB1、VitB12等［1］。山茱萸多糖具有免疫調節活性及明顯的抗氧化作用［2，3］隨著我國社會 經濟 文化的 發展 ，人們的生活質量普遍提高，因此具有保健預防功能的山茱萸越來越引起國人的重視。本實驗以多糖得率為指標，採用正交實驗對山茱萸多糖的提取工藝進行優選，以期找出合理可行的製備工藝並研究分析其部分理化性質。
1 器材和方法
1.1 材料
供試山茱萸乾燥果實產於安徽,購於廣州中醫藥大學大藥房有限公司中藥飲片廠，將山茱萸原料粉碎,置乾燥器中備用。
1.2 試劑
濃硫酸，質量分數為6%的苯酚(分析純重蒸餾試劑),質量分數為95%的乙醇,氯仿,正丁醇,葡萄糖, 氯化鈉等,以上試劑均為分析純。
1.3 儀器
核酸蛋白測定儀,德國Hettich公司；自動收樣器,美國Whaters公司；AlphaI- 2 型真空凍干機,德國Christ公司；電熱恆溫水槽(DK8D型), 上海森信實驗儀器有限公司；高速冷凍離心機,德國Hettich公司。
1.4 方法
1.4.1 粗多糖樣品的製備
山茱萸乾粉,不同條件加熱(攪拌)浸提,離心,上清液加熱濃縮至體積的1/4,95%乙醇沉澱至75% (V/V)，4℃靜置過夜, 離心,取沉澱,丙酮乙醚無水乙醇溶劑系統反覆沖洗,真空冷凍乾燥得到粗多糖樣品。
1.4.2 山茱萸多糖含量測定［4］
採用苯酚-硫酸法, 以葡萄糖為標準單糖製作標準曲線，得回歸方程為：Y=0.007 7X+0.025 7, R2=0.999 5 ［多糖的量（μg）為橫坐標，光密度值為縱坐標］。
準確稱取粗多糖樣品6 mg,加蒸餾水至50 ml,配成120 μg/ml的樣品溶液。吸取樣品液1.0 ml，按標準曲線同法操作，測光密度，以標準曲線 計算 總糖含量。
1.4.3 得率的計算山茱萸多糖得率(%)=山茱萸粗多糖樣品中總糖含量(g)/山茱萸原料質量(g)×100%。
1.4.4 單因素分析及正交實驗
本實驗選取溫度、時間、料液比、pH值這4個因素進行分析,並從中選取3個因素水平根據單因素分析結果, 採用L9(34)表做正交實驗,以多糖提取率作為衡量提取效率的客觀指標，以確定最佳提取工藝。
1.4.5 山茱萸多糖的分離純化
按最佳提取工藝流程,將提取的紅褐色山茱萸粗多糖(ZA)復溶於水, 用Sevag［5］法除蛋白,重複3次,加95%乙醇至30%,離心,得到粗多糖(ZB),上清液繼續加95%乙醇至60%,4℃靜置過夜, 丙酮-乙醚-無水乙醇溶劑系統反覆沖洗,真空冷凍乾燥,得到粗多糖樣品(ZC)。稱取樣品AC 200 mg,溶於100 ml蒸餾水中,然後加到DEAE-cellulose-52離子交換柱洗脫(2.6 cm×26 cm)上,依次用蒸餾水及0.1，0.3，0.5，0.8，1.0 mol/L的NaCl水溶液洗脫,多功能 電子 蠕動泵控制流速為1 ml/min,用自動收集儀收集,苯酚-硫酸法跟蹤檢測多糖,合併各吸收峰的洗脫液,蒸餾水透析3 d，旋轉蒸發儀濃縮,冷凍乾燥,得到山茱萸多糖的兩個分離產物S1 和S2。
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